有人作过PCR产物纯化的么？

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标题:有人作过PCR产物纯化的么？

去看海[使用道具]
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发表于 2011-8-24 15:07 资料个人空间短消息加为好友

小中大

有人作过PCR产物纯化的么？ [转自丁香园论坛]

我说的是那种，把产物电泳后，选需要的带，从琼脂糖或者PAG中割下，加温的

我老板说是这么做的，但是我不是太确定，还想问问各位是否真的是如此

另外，我看UV的片子可以确定带的位置，但是在胶上不一定能找到我的带的确切位置啊，各位怎么实现的

请指点谢谢

假小子[使用道具]
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发表于 2011-8-24 15:07 资料个人空间短消息加为好友

小中大

什么意思啊？切胶也是在紫外灯下做的啊。

夕阳[使用道具]
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发表于 2011-8-24 15:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们用的是鼎国的回收试剂盒，PCR产物跑电泳后，在短波紫外下快速确定目的片段在胶上的位置，然后换长波紫外下切胶，65度溶胶。目的片段不能在短波下暴露太长时间，以免形成嘧啶二聚体。然后按说明操作就可以了。

=菓子=[使用道具]
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发表于 2011-8-24 15:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

具我的经验pcr产物纯化并不一定要用试剂盒,我用自己的方法纯化的效果反而更好,而且节约!!步骤如下:
1.紫外灯下切胶,(目的片段)
2.TE 溶.
3.取溶液,用氯仿, Tris- 饱和酚抽提数次,3-4
4,无水酒精沉淀,
5.70%酒精洗2次
6.-20 保存即可

去看海[使用道具]
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发表于 2011-8-24 15:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 假小子 于 2011-8-24 15:07 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
什么意思啊？切胶也是在紫外灯下做的啊。

是这样的，我们实验室的成相系统，不能监视操作

是抽屉式的，把抽屉拉出来操作，就没有像了

明白了么

去看海[使用道具]
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发表于 2011-8-24 15:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 =菓子= 于 2011-8-24 15:08 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
具我的经验pcr产物纯化并不一定要用试剂盒,我用自己的方法纯化的效果反而更好,而且节约!!步骤如下:
1.紫外灯下切胶,(目的片段)
2.TE 溶.
3.取溶液,用氯仿, Tris- 饱和酚抽提数次,3-4
4,无水酒精沉淀,
5.70%酒精洗2 ...

非常感谢您的回答

顺便问一句

如果仅仅是为了测序，纯化步骤应该怎么样？我老板

去看海[使用道具]
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发表于 2011-8-24 15:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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