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标题:[未解决]质谱直接进样的问题

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
wangtaofrank[使用道具]
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发表于 2009-4-6 21:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

质谱直接进样的问题

我做的LC-MS分离磷脂。现在先做磷脂标样的直接进样。LC的起始流动相是正己烷：异丙醇：甲酸铵=56.7：37.8：5.5。进样的标样是用正己烷：异丙醇=2：1配置的，老师说不能含盐的溶液直接进样，这样会污染离子源。但是不含盐的溶液进样效果不好，浓度是1ppm。我的问题是：1.正己烷：异丙醇：甲酸铵=56.7：37.8：5.5，这个配比的溶液是完全能完全溶解吗？会不会产生悬浮液，这个是参照文献的方法做的，有人也把甲酸铵换成乙酸和氨水。
2.用直接进样的话是加盐好，还是不加盐好？我现在做的标样优化条件，没有加盐，有些标样的质谱峰并不好，我考虑是不是因为有些磷脂是两性的，如PC、PE和SM等，加盐应该能促进电离。不知道直接进样加盐的话会有什么危害？或者用有机酸调节样品的pH来促进电离的方法可以吗？谢谢高手的指点。
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发表于 2009-4-7 12:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
质谱不可以用不挥发性盐，但挥发性盐是可以使用的，我们就经常在移动相里添加乙酸胺改善峰形（LC/MS/MS）
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发表于 2009-4-7 14:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一般样品离子化及峰型差不多是不加盐！
有些样品必须加盐才有好的峰型和离子化效率

但做完样品后一定要及时清洗整个系统！
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发表于 2009-4-7 14:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
帮LZ问了一位老师，回复如下：

加入盐会抑制待测物的电离，并且污染质谱仪。

加入有机酸、乙酸铵、氨水调节PH值应该可以有改善。

另外，可参见：质谱沙龙第十一期活动报道，中关于盐的讨论
cuturl('http://www.antpedia.com/html/74/n-14774.html')
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aa_tang[使用道具]
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发表于 2009-4-7 21:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
磷脂分析，脂质组学，楼主对脂类的分离采用正相HPLC，却是ESI源的话，离子化效率自然不怎么好，当然添加挥发性缓冲液甲酸铵有助于离子化，个人建议添加量控制在5mM以下。

为什么一定要采用NP-HPLC来分离呢，个人觉得RP-HPLC更合适，楼主是否可以考虑采用C8柱，乙腈-醋酸铵缓冲液体系（调pH值 5.0），来进行磷脂分析，效果不错。（ps：以前在学校的时候，见师兄用过这个方法做脂肪肝代谢综合征脂肪酸代谢分析）

当然了，不一定适合楼主的情况，供参考吧。

做磷脂分析，Washington University 大牛Prof. R W Gross算得上是骨灰级人物，O(∩_∩)O哈哈~
Electrospray ionization mass spectroscopic analysis of human erythrocyte plasma membrane phospholipids
cuturl('http://www.pnas.org/content/91/22/10635.abstract')

Quantitative analysis of biological membrane lipids at the low picomole level by nano-electrospray ionization tandem mass spectrometry
cuturl('http://www.pnas.org/content/94/6/2339.full')

Technological developments in lipidomics
cuturl('http://bfgp.oxfordjournals.org/cgi/content/abstract/7/5/395')

Lipid Analysis Literature - Lipidomics
cuturl('http://www.lipidlibrary.co.uk/lit_surv/general/lipidome.htm')

Mass Spectrometry of Lipids Symposium
cuturl('http://lc-ms.byrdwell.com/Abstracts.html')

ps：楼主若担心三相溶液在线混合不互溶，可以考虑事先手动混合。磷脂分析方面的文献更新很快滴，建议楼主多跟踪文献，毕竟这方面的研究正处于炽热状态，若是做得跟别人撞车了，下手不快，文章就不容易出了。
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wangtaofrank[使用道具]
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发表于 2009-4-8 20:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢各位高手的回复，做几种磷脂的分离的话，用正相分离的比较多，反向一般是适用于单一种类的磷脂中不同脂肪酸链的磷脂的分离。现在也有人用二相色谱分离来检测磷脂，即先用正相再用反向。国际上做脂类的牛人比较多，华盛顿大学和Kansas州立大学的做的都很好，如Welti Ruth和Fong-Fu Hsu等，这里面也有中国人的贡献，如韩贤林，王学敏等。专家给我发的网站也很实用，谢谢了~！
既然说加入加入有机酸、乙酸铵、氨水调节pH值应该可以有改善。那加入甲酸铵应该也是可以的吧？这个正相溶液的条件是参照一篇文献的，因为比较了一下几种方法，感觉他做的效果还是比较好的。最初设想是用三级四极杆直接进样做ESi-MS/MS的，不用HPLC分离，无奈自己实验室没有质谱仪，用的是楼上的分析测试中心的仪器，那边的老师说样品不做纯化前处理的话，怕污染仪器，让我先用离子阱做，不行的话再换仪器。下一步我想先加乙酸试试，不行的话再加甲酸铵试试，用人家的仪器没得办法，得听人家的。谢谢各位高手的指点。

[ 本帖最后由 wangtaofrank 于 2009-4-8 20:20 编辑 ]
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aa_tang[使用道具]
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发表于 2009-4-9 23:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢楼主分享脂类分析实战经验！ 学习ing
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