小中大【求助】全血基因组DNA提取问题
我用的是上海生工的血液基因组DNA小量抽提试剂盒(离心柱型)的,可是我提完之后跑电泳,看不到任何带子。我其中的问题可能是:
1)说明书---在500μl血液中加入800μl的TBP Buffer用1ml的Tip 头轻轻吹打使其彻底混匀,而后4,000转/分离心3分钟,弃上清。
本人做实验----离心转数8000转/分;弃上清时,我没有用枪头吸出,而是轻轻将上清液倒出,只留下管底一点点无色透明的沉淀,特别少。这样对吗?是不是上清去除的太多了?也不应该直接倒?我发现用枪头吸的话有时会吸到最底层的沉淀。
2)说明书---在准备好的200μl样品中加入500μl TBM Buffer,混匀;再加入4μl Proteinase K,混匀,55℃保温10~20分钟。
本人做实验---保温30-40分钟。因为我的血标本时间最长的可到14个月。是不是保温时间太长了?
3)我跑电泳的琼脂糖胶浓度为1%,我加的电压是250V,时间是20分钟。紫外灯下观察,什么也没有。
其他步骤完全是按照试剂盒说明书进行的。我已经连续做了6个,都不行!心里很难过。我们实验室的分光光度计不能用。现在放假,别的科室也没有人。我真是...
大家看看我到底是哪一步出问题了?还有,今天我怕是我采的血时间太长,DNA降解了,我直接抽自己的新鲜血提的DNA,还是不可以。实验室就我自己,我急的都哭了!明年就毕业了,可是连个DNA都提不出来,PCR更是别说!
更附:DNA提取试剂盒说明书,我实在找不出我失败的原因。