同样的材料和程序P出来以后怎么也p不出来怎么回事？

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标题:同样的材料和程序P出来以后怎么也p不出来怎么回事？

哇啦[使用道具]
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发表于 2011-8-30 15:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

同样的材料和程序第一次可以P出来以后怎么也p不出来怎么回事？？[转自丁香园论坛]

我做的是HLA-A2的分型拿到引物后开始做PCR 第一次就P出来了因为我们要优化它的条件已达到稳定和高效，就做了第二次退火温度稍微上调了3℃ 发现没条带了回过来用第一次的条件再P却怎么也出不来了只有内参有明显的条带重新提取基因组（鉴定过的没问题）用新的酶、buffer、和dNTPS 另外重新溶解了新的引物重新做PCR 结果还是只有内参有条带而没有目的条带我把条件和材料改了又改换了又换还是没有都好久了急死人啊那位大虾帮忙分析一下怎么回事？感激不尽！

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发表于 2011-8-30 15:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我现在也遇到同样的问题，也疑惑着。

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发表于 2011-8-30 15:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

第一次能P出来，第二天满怀信心的再p，却怎么也不出来了，折腾了近一个月，先怀疑CDNA有问题，提的RNA又重新测得浓度，又重新逆转录的，每次都是有actin，目的条带也没有，找了个阳性对照，阳性对照有条带，可是我的实验组却没有，不知道是怎么回事，现在打算重新养细胞，重新提RNA，重新逆转录，重新PCR，看看有没有了。

哇啦[使用道具]
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发表于 2011-8-30 15:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的东西都换新的还是P不出来都不知道什么原因！！那个郁闷求那位带下帮忙分析分析啊都很久了导师等着我去做汇报啊

嗨皮[使用道具]
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发表于 2011-8-30 15:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果是温度的关系，试试touch down，内参能扩出来是正常的，一般内参的条带比较小

你的目标条带是多大的？

把水也换了试试，额，有次我就是因为水不对然后P不出来，别灰心，耐心点吧，没东西的话，降温然后调MG强度试试

森林木[使用道具]
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发表于 2011-8-30 15:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我现在也遇到同样的问题，也疑惑着。

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发表于 2011-8-30 15:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由嗨皮于 2011-8-30 15:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
如果是温度的关系，试试touch down，内参能扩出来是正常的，一般内参的条带比较小

你的目标条带是多大的？

把水也换了试试，额，有次我就是因为水不对然后P不出来，别灰心，耐心点吧，没东西的话，降温然后调MG强度试试 ...

谢谢了换了个PCR机子结果出来了原来是那个PCR机的问题呵呵非常感谢你的建议