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标题:【求助】RT-PCR的结果中得到的2-△△CT的数...

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发表于 2015-8-3 15:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】RT-PCR的结果中得到的2-△△CT的数...


好不容易把结果做出来了，但是在数据处理时把握给难住了。首先是不是很理解RT-PCR的结果中2-△△CT的数值类型该用何种统计方法进行计算。还请各位同仁给予指点RT-PCR数据结果如何进行计算。在下万分感谢。
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发表于 2015-8-3 15:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的问题是：计算出来的2-（ΔCt2正常-ΔCt1正常）是倍数关系，如何进行统计计算呢？
谢谢！
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发表于 2015-8-3 15:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
相对定量就是用来比较样品与参照之间的表达量差异，有了这种倍数关系后，采用生物统计学的方法来检验是否具有显著性差异。
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发表于 2015-8-3 15:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

您的意思就是指用所得的这个倍数值去比较各样品之间某基因的表达差异吗？如若是，那这些比较所得的倍数关系该采用什么统计方法？谢谢！
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qianqin1977[使用道具]
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发表于 2015-8-3 15:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

做定量PCR分析基因表达量的变化，通常是为了验证我们的处理方式（比如加药和不加药、疾病组织和正常样本、基因敲除和正常样本）产生的结果，我们要得到的是该基因表达是否有变化，变化了多少，是否有显著性变化，比如说对照组样品该基因的表达量都在一倍左右，样品组的表达量都在3倍左右，那这种变化就很明显了。我们用定量PCR得到这种结果之后，用生物统计学得方法再验证下是否具有显著性就好了
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发表于 2015-8-3 15:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
相关疾病：
比如我的实验是用RT-PCR的方法比较恶性肿瘤组与良性肿瘤组以及正常组之间某基因的表达差别，我实验数据得到了各组各样本的2-△△CT值，那我该如何进行计算呢？还望多帮助。
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发表于 2015-8-3 15:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

很简单，各组样本做ks检验，如果符合正态分布可以使用方差分析。不符合可以使用非参数检验，也可以对-△△CT行ks检验，相当于对结果做对数变换，如果符合使用方差分析。有一个SAM软件可以直接处理找差异基因的数据。不过他是基于t检验的，所以应满足正态分布。
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2015-8-3 15:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
给大家推荐一下这篇pdf，《Analyzing real-time PCR data by thecomparative CT method》cuturl('http://d.dxy.cn/detail/1186299')或生物在线上可以下载 ，看完之后解决即使分析没问题。
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发表于 2015-8-3 15:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我找到一篇硕士论文，他的统计方法是以倍数值和1做比较，比如A基因治疗前后2-△△CT的值为3，则把治疗后A基因表达量设定为3，而治疗前表达量为1。然后再T检验。也不知这样对不对。
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