小中大简易组织提取总RNA方法
看了些提取RNA的帖子,感觉都太过复杂了,我也做了RNA提取感觉要简单的多,写给大家分享
采用生工的RNA提取试剂盒
将组织从-70度冰箱或液氮中取出解冻(不必完全解冻,特别是一些软组织,略硬一些更好称取,也不必须放在-4度),用手术刀、镊子、剪刀等工具(不必须用DEPC水处理,用前用酒精烧烤,然后放到-20或-70冰箱冷却就可)称取30mg(一个柱子的量),放入已经在-70度冰箱预冷15分钟的小研钵中(预冷前倒入酒精烧内壁和研杵),冷冻10分钟左右,取出研磨(小心冻手,小心组织块飞溅),研磨成粉状后加按试剂盒说明加入Trizol等试剂,其他完全按试剂盒操作就好,只需离心几次(不必低温离心)就好。所用吸头等均买RNA酶free的就好,无需DEPC。
优点:快速,无毒,操作简单
另:无特殊要求无需做RNA浓度鉴定和电泳检验RNA完整性,可直接用内参进行一步法RT-PCR验证RNA质量。比大部分人的操作节省N多时间,操作少,RNA损失和变性的可能也就小了。我的3个基因序列都已测出了,很简单。