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标题:简易组织提取总RNA方法

阿拉蕾[使用道具]
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简易组织提取总RNA方法

看了些提取RNA的帖子,感觉都太过复杂了,我也做了RNA提取感觉要简单的多,写给大家分享

采用生工的RNA提取试剂盒

将组织从-70度冰箱或液氮中取出解冻(不必完全解冻,特别是一些软组织,略硬一些更好称取,也不必须放在-4度),用手术刀、镊子、剪刀等工具(不必须用DEPC水处理,用前用酒精烧烤,然后放到-20或-70冰箱冷却就可)称取30mg(一个柱子的量),放入已经在-70度冰箱预冷15分钟的小研钵中(预冷前倒入酒精烧内壁和研杵),冷冻10分钟左右,取出研磨(小心冻手,小心组织块飞溅),研磨成粉状后加按试剂盒说明加入Trizol等试剂,其他完全按试剂盒操作就好,只需离心几次(不必低温离心)就好。所用吸头等均买RNA酶free的就好,无需DEPC。

优点:快速,无毒,操作简单

另:无特殊要求无需做RNA浓度鉴定和电泳检验RNA完整性,可直接用内参进行一步法RT-PCR验证RNA质量。比大部分人的操作节省N多时间,操作少,RNA损失和变性的可能也就小了。我的3个基因序列都已测出了,很简单。
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麻瓜[使用道具]
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嗯,学习了,看来我这细节还是有问题啊!
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mogu[使用道具]
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请问楼主,内参进行一步法RT-PCR是什么意思?
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花裙子[使用道具]
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请问烧多少小时?正在为提取前处理玻璃匀浆器而苦恼,因为实验室烤箱坏了只能到60度。
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阿拉蕾[使用道具]
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只要高温烧一下就行了,一般1-2分钟即可
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天蓝蓝[使用道具]
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好像太简单了点啊
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+田田+[使用道具]
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我们得是塑料匀浆器,怎么处理啊?
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阿拉蕾[使用道具]
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没有用过,塑料的是不是一次性的?是不是无RNA酶的,总之没有RNA酶就可以了
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旋转木马[使用道具]
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不是一次性的,是我们之前提蛋白用的。 我用180度高温烤, 刚去看了看发现给烤化了 。 真是麻烦! 还不知用什么提RNA呢 !老板知道了肯定会狠狠的批我一顿  
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旋转木马[使用道具]
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不是一次性的,是我们之前提蛋白用的。 我用180度高温烤, 刚去看了看发现给烤化了 。 真是麻烦! 还不知用什么提RNA呢 !老板知道了肯定会狠狠的批我一顿  
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