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标题:【求助】荧光定量PCR扩增效率

二丫头466[使用道具]
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发表于 2015-8-5 15:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】荧光定量PCR扩增效率

荧光定量PCR
请问各位高手如何从扩增曲线上看出扩增效率呢？
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发表于 2015-8-5 15:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

引物的扩增效率要做专门的标准曲线里看。在扩增曲线里看不到。
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二丫头466[使用道具]
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发表于 2015-8-5 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

必须要做标准曲线才能看出扩增效率吗？
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cj_mondy[使用道具]
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 小中大

cuturl('http://www.gene-quantification.de/efficiency.html') 多看看文献怎么操作的？
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 小中大

cuturl('http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2665230/')
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发表于 2015-8-5 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

必须得做标准曲线的
计算公式如下：
e=10-1/a-1
e为扩增效率
a为截距
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发表于 2015-8-5 15:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还可以把扩增产物跑电泳，看条带的亮度和粗细，但很粗略，勉强算半定量，要计算具体的扩增效率还是要用标准曲线。。。
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发表于 2015-8-5 15:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这是我的产物跑的胶，第2到4个道是内参，最右边两个是目的基因，请问这能不能算扩增效率一致呢？


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发表于 2015-8-5 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

从电泳亮度比较扩增效率恐怕太牵强了吧，那还不如看同一个基因的Ct值，对于同一个基因而言，Ct值越小，扩增效率越高，但是只能比较，而不能计算具体数值。
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发表于 2015-8-5 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 二丫头466 于 2015-8-5 15:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
荧光定量PCR
请问各位高手如何从扩增曲线上看出扩增效率呢？

1.是做相对还是绝对定量？
2.绝对定量是必须要。
3.相对定量，如果是delta delta Ct ,可以用1.8来代替2。
4.在最后给出的曲线中，我在SDS中没有找到可以导出原始数值的方法，只可以看到原始的扩增曲线图片，这个很难得到像文献中可以算出扩增效率的。
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