小中大【分享】细胞冻存与复苏
细胞的冻存是保持细胞系的重要途径,因此掌握细胞冻存技术对实验研究者来说是不可缺少的,现介绍自己成功冻存的经验,与大家共享Big Smile
1 冻存细胞健康程度 一般要求活细胞在95%以上,细胞活力差的在冻存后的成活机率很小,因此,一定要在细胞旺盛分裂时期冻存Black Eye
2 冻存细胞量要多,一般10*6-7/ml,冻存液比例培养基7:血清2:DMSO1,也有将血清比例加大的做法,有的甚至将血清提高到90%,具体浓度视经验而定Clown
3 混合DMSO要快,因为DMSO对细胞有毒性,混合之后应尽快冻存Tongue
4 冻存 遵循缓冻速融原则,冻存步骤为-4度30分钟—— -20度1-2小时—— -80度过夜——沉入液氮。也可以用棉花或泡沫塑料封好后直接-80过夜,然后沉入液氮Smile
5 复苏 将冻存细胞取出,快速放入37度水浴中待细胞融化后立即取出,超净台上转至细胞瓶中,然后缓慢加入培养基,边加边摇动细胞瓶,最后加20%血清Blush
6 后处理 复苏后1-2小时,待细胞贴壁后,缓慢将培养液倒出,加入新鲜培养基,血清(15%),培养3天观察