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标题:PCR产物的A真的会掉吗？

桔囿[使用道具]
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发表于 2011-9-6 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

PCR产物的A真的会掉吗？

PCR产物的A真的会掉吗？ [转载]


听有人说：PCR 产物如果不马上克隆到T载体，存放时间久了，末端的A会掉。这是真的吗？
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@木木@[使用道具]
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发表于 2011-9-6 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
A尾是酶后加的，有的产物就没有，高保真酶拉的产物就没有，不管怎样 我认为PCR产物最好还是尽早TA克隆，很容易降解的。
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大仙[使用道具]
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发表于 2011-9-6 11:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我对“PCR 产物如果不马上克隆到T载体，存放时间久了，末端的A会掉”的说法表示怀疑，对于没有3‘至5’外切酶活性的Taq酶来说，这种情况似乎不应该发生。
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guagua[使用道具]
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发表于 2011-9-6 11:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不会掉，我试过存了半年的PCR产物、没问题。
到时不知为什么，连接时间过长，比如放了一周以后再转菌就不行了
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阿福[使用道具]
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发表于 2011-9-6 11:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可能是DNA降解了，冻存的连接产物没有问题
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小米虫子[使用道具]
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发表于 2011-9-6 11:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的PCR产物（Taq酶做的）纯化了半个月了，做了几次T连接，但好像都没成功，转了几次，找不到阳性菌。使我不得不怀疑A是不是掉了，或着可能是cDNA降解了。
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guagua[使用道具]
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发表于 2011-9-6 11:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用过一个月的,没问题.换个角度考虑问题,会不会是ta克隆试剂盒,有问题.
作实验要心细,一步有问题,就会得不到结果.解决问题的方法就是要怀疑一切,然后重点突破.我本人的一点体会.
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大仙[使用道具]
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发表于 2011-9-6 11:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
两节前跑电泳了吗，是否降解和浓度多大，跑个电泳就全结了，
插入子的浓度决不可用分光光度仪决定，
不准，太不准了，
跑个电泳，和Mark一比就全出来了。

祝你好运
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阿拉蕾[使用道具]
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发表于 2011-9-6 11:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不一定是A掉了的原因，检查一下
1，目的片段和载体的比例，片段长，应增大比例；
2，PCR用的什么酶？高保真的酶需在延伸时进行加尾；
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