生物制药 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】胶原酶溶液如何配制

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 33  1/4 1234››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】胶原酶溶液如何配制

子衿青青[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103467
精华 0
积分 212
帖子 164
信誉分 100
可用分 1556
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
1

发表于 2015-8-11 16:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】胶原酶溶液如何配制


配制1mg/ml的胶原酶溶液是用pbs来配，还是用三蒸水配制，是否可用培养液来配啊
顶部
66+77[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75637
精华 1
积分 596
帖子 785
信誉分 103
可用分 4751
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-10-26
状态 离线
2

发表于 2015-8-11 16:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
应该用PBS或Hanks来配，胶原酶发挥作用需要离子强度和合适PH值，光用三蒸水配不利于酶的活性，培养液也不太适合。还要将PH值调到7.4左右。
顶部
dog002[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76386
精华 0
积分 916
帖子 1452
信誉分 100
可用分 8133
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-4
状态 离线
3

发表于 2015-8-11 17:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你可以根据你用胶原酶的目的来配置。如果你是用来消化组织的话你可以用pbs和培养液来配置。一般胶原酶比较合适的ph值在7.3-7.7都可以。浓度你可以配成0.025%，毕竟这是很贵的东东啊！
顶部
veiwu[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 107977
精华 1
积分 513
帖子 662
信誉分 102
可用分 4122
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
4

发表于 2015-8-11 17:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

好像文献上都是用的1mg/ml的胶原酶溶液阿，用0.025%的行吗？是不是消化时间要延长阿？
顶部
jude[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72164
精华 1
积分 599
帖子 754
信誉分 102
可用分 4721
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-5
状态 离线
5

发表于 2015-8-11 17:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

0.1％～0.3％的胶原酶，0.025的浓度太低了。
顶部
gmt[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 117811
精华 0
积分 241
帖子 202
信誉分 100
可用分 1771
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-12-7
状态 离线
6

发表于 2015-8-11 17:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可是我用来消化肝细胞效果却很好啊，我想着应该是没有什么问题的。当然树上的确是说的0.1-0.3mg/ml。那就看你用脚远没做什么啦。
顶部
qianqin1977[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75849
精华 0
积分 370
帖子 460
信誉分 100
可用分 3076
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态 离线
7

发表于 2015-8-11 17:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
胶原酶应该用D-Hank氏液来配。
不能用三蒸水因为渗透压太低细胞不能耐受，也不能用培养液因为其中的成分复杂对消化有影响，最好也不用Hank氏液因为ca+Mg2+离子易与一些成分结合形成沉淀影响分离（但这是理论上，我曾经试过结果也还不错），PBS文献上没见过，但应该理论上可以用的。
另外常用浓度为0.1%~0.2%，当然还要看你做什么。
顶部
JK.jon[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75188
精华 1
积分 528
帖子 652
信誉分 102
可用分 4146
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
8

发表于 2015-8-11 17:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
配制胶原酶首先要看你的目的是什么，其次要看消化的是什么组织。不同的组织需用不同的浓度，不同的浓度消化时间也不同。而且，每一批胶原酶很可能质量不完全一样，所以效果不稳定。胶原酶绝对不能用三蒸水配，渗透压不对，即使消化下来细胞，可能活力很差，不等贴壁就over了。PBS或培养液均可，我都用过。
顶部
shenkunjie[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76942
精华 0
积分 712
帖子 1124
信誉分 100
可用分 6420
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-11
状态 离线
9

发表于 2015-8-11 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用来分离干细胞的胶原酶的配制方法是：hepes缓冲液 200ml，胶原酶 0.05g,无水CaCl2 0.15g. hepes缓冲液ph:7.65 37度消化 。效果挺好的
顶部
zhy平平[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114517
精华 0
积分 291
帖子 282
信誉分 100
可用分 2163
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
10

发表于 2015-8-11 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果是消化软骨，建议采用的浓度为0.2%,用D_Hanks 配。不知道，你消化的是透明软骨还是弹性软骨，或是纤维软骨？
顶部
 33  1/4 1234››