小中大我是这样认为的，cDNA的浓度并不能十分准确的测得，知道大概范围就可以了。你做定量PCR的时候首先要对你的目的基因进行扩增效率的调整，做个标准曲线，确定最佳的模版浓度、引物浓度等条件。分析定量时候一般取Ct:15-35。太大或者太小都会导致定量的不准确。下面一段是转自生物吧的一篇文章，你可以看看。你可以知道怎么调整CT值和做比较准确的定量，如果你需要具体的protocol我有关于定量PCR的文章，部分信息也来自丁香园的战友，如果需要，相应的资料我可以发送到你邮箱里（把邮箱地址给我就可以）
2.影响Ct值的关键因素
模板浓度
模板浓度是决定Ct的最主要因素。控制在一个合适范围内，使Ct在15-35之间。
反应液成分的影响
任何分子的荧光发射都受环境因素影响----比如溶液的pH值和盐浓度。
PCR反应的效率
PCR反应的效率也会影响Ct值。在PCR扩增效率低的条件下进行连续梯度稀释扩增，与PCR扩增效率高的条件下相比，可能会所产生斜率不同的标准曲线。PCR效率取决于实验、反应混合液性能和样品质量。一般说来，反应效率在90-110%之间都是可以接受的。
(转自cuturl('http://www.biobars.cn/a/jishu/PCRshiyan/20110618/7374.html')）
谢谢您的解答。我现在遇到的问题是实验的重复性不好，下图
同一个样本做了3次平行实验，CT值相差很大，像1号样本从30.14到34.07，CT值相差4，实验结果不可用（cDNA同一个，加的量也一样），请教你这是什么原因呢？困惑。。这是我q-pcr之后跑的电泳，你看cDNA加的量可以不？亮的是看家基因，淡的是目的。
扩增曲线，溶解曲线如图，两个基因，一个目的，一个看家。
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