小中大【求助】怎样做到PCR的热启动!
手动热启动法:
通常是先加模板DNA,再加入冰上预冷的Buffer、MgCl2、dNTP和ddH2O,接着将正反引物加到PCR管壁上(不使引物沉到管底),打开PCR仪,预热到80度,再加Taq酶到PCR管壁上,10000rpm甩5秒,立即放如预热的PCR仪上,开始循环。
热启动技术有很多产品,如(1)Taq酶在蜡块中,加热到94度,蜡块溶解Taq酶进入反应系统(2)Taq酶-Taq酶单抗复合物,94度10分钟灭活Taq酶单抗,使Taq酶发挥作用。可是以上的产品均较贵,反正我用不起。而又要防止非特异性产物。
根据Invtrogen手册的一张图谱,手动热启动法的效果与Platinum Taq酶(有单抗)相当。