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标题:溴甲酚绿法测定血清白蛋白(一)
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发表于 2015-9-4 21:39
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溴甲酚绿法测定血清白蛋白(一)
关键词:农药标准品 环境监测标准物质 标准品进口 中检所对照品
【实验原理】
白蛋白在pH 4.2的缓冲液中带正电荷,在有非离子型表面活性剂存在时,可与带负电 荷的染料溴甲酚绿结合形成蓝绿色复合物,在波长628nm处有吸收峰,其颜色深浅与白蛋白浓度成正比,与同样处理的白蛋白标准比较,可求得白蛋白含量。
【试剂与器材】
l.BCG试剂于950ml蒸馏水中加入0.105g BCG(或0.108g BCG钠盐),8.85g琥珀酸,0.1g叠氮钠,和4ml浓度为300g/L的聚氧化乙烯月桂醚(Brij一35)。待完全溶解后,用6mol/LNaOH调节pH至4.15~4.25。然后用蒸馏水加至1L。分光光度计628nm波长下,蒸馏水调零测BCG试剂吸光度,应在0.150A左右。将试剂贮存于聚乙烯塑料瓶中,密封保存,置室温中至少可稳定6个月。
2.BCG空白试剂除不加BCG外,其余成分和配制方法完全同BCG试剂的配制方法。
3.40g/L。白蛋白标准液称取人白蛋白4g、
叠氮钠
50mg,溶于蒸馏水中并缓慢搅拌助溶,配成100ml,密封贮存于4℃冰箱,可稳定半年。也可用定值参考血清白蛋白标准。
4.仪器 自动生化分析仪或分光光度计。
【操作步骤】
1.自动生化分析法 参数设置参照自动生化分析仪及试剂盒说明书。
2.手工操作法
在波长628nm处用空白管调零,逐管加入BCG试剂,并立即混合,每份血清标本或标准液与BCG试剂混合后,均需在(30士3)秒内读取吸光度。
如标本因严重高脂血症而混浊,需加做标本空白管(取血清0.02ml,BCG空白试剂5.0ml,在波长628nm处用BCG空白试剂调零,测定标本空白管吸光度)。用测定管吸光度减去标本空白管吸光度后,用净吸光度计算标本白蛋白浓度。
【结果计算】
血清白蛋白浓度(g/L)=测定管吸光度/标准管吸光度×标准液浓度
用双缩脲法测定血清标本中总蛋白浓度,减去血清白蛋白浓度即为球蛋白浓度,并可求得血清白蛋白、球蛋白比值(A/G比值)。
【参考区间】
4~14岁儿童血清白蛋白浓度38~54g/L
健康成人血清白蛋白浓度34~48g/L
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