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标题:【求助】MTT试验

purrr[使用道具]
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发表于 2015-9-10 11:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】MTT试验


我做的MTT试验，接种到96孔板，细胞密度是10*6/ml，每孔加样0.2ml，细胞生长良好，正常贴壁，加入MTT之后4小时，吸去培养液，整个96孔板几乎没有蓝色的颗粒，就像刚拆了包装的板子一样。加入DMSO后检测，OD值非常小，都在0.2以内。MTT是新配的，各个步骤也没有犯严重的错误，究竟是什么原因，请高手指点。
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youyou99[使用道具]
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发表于 2015-9-10 11:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

建议加DMSO之前镜下观察有无细胞？细胞形态是否完整？
（1）如果无细胞，则是吸去培养液时丢失了细胞。（2）如果有细胞，且细胞形态仍然完整，则是MTT失效。（3）如果有细胞，但细胞形态不完整，可能是MTT配置有误。
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yizhi[使用道具]
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发表于 2015-9-10 11:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是不是细胞密度过小阿，你的10*6,是60还是10的六次方阿
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purrr[使用道具]
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发表于 2015-9-10 11:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是10的6次方，应该细胞数是足够的。
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youyou99[使用道具]
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发表于 2015-9-10 11:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得是MTT失效,,细胞不可能全部被吸走的,最好在倒置显微镜下面看一下.
在加MTT前观察一下是否有细胞,加完MTT之后再观察一下是否有结晶,如果没有任何结晶可能是MTT的问题
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kulee[使用道具]
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发表于 2015-9-10 11:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我以前做的，加了MTT后，直接加入DMSO。
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whitesheep[使用道具]
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发表于 2015-9-10 11:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

加mtt的时候建议熄灭酒精灯，反正无菌无所谓了，还有我做mtt时，浓度1mg/ml都有结果，避光冷藏一周内用完
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发表于 2015-9-10 11:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

mtt怕光啊
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toy[使用道具]
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发表于 2015-9-10 11:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想请教一下，我的细胞污染了加MTT马上就变成蓝色了，WHY？
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junhun[使用道具]
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发表于 2015-9-10 11:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你在吸走培养液之前，可以在倒置显微镜下看看每个孔，如果形成甲簪，在孔底部可看到晶状物。
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