小中大引物设计,模板、dNTP、引物浓度,反应条件等等这些会影响PCR结果,教材都有讲的,我就不罗嗦了。谈点自己的体会:
如果要做n管,就把除模板之外的其他部分按照n+1份配好,然后再分装,如:
10 x buffer 5ul
dNTP 4ul
引物1 1ul
引物2 1ul
taq酶 1ul
ddw 34ul
模板 2ul
共有9个模板,就把除模板外的其他成分乘10,即buffer50ul,dNTP 40ul ,引物1 10ul,引物2 10ul,taq酶10ul,ddw 340ul,加到一个离心管中,加盖,用力振荡使混匀(这步是必要的,否则分到各管中的体系步均匀,会影响结果,我第一次PCR就是因为没混匀结果没做出结果),稍稍离心一下,然后分装至9个PCR管中,每管48ul,在依次加入模板2ul,混匀,稍稍离心,上机。
还有就是吸取微量液体是,tip头尽量不用浸入液体太多,否则枪头外面附着的液体会影响加样的精确度。