小中大【转帖】细胞冻存、复苏－致命败笔（troubleshoot）
在坛子里经常看到询问冻存、复苏细胞的方法和注意事项。
我新开此贴，专门介绍一些致命的“败笔”，和解决方法。(以Raji为例）
希望对大家有帮助。
细胞冻存：
1. 错误的时机：
细胞状态不好（长的太过了，培养液已经很黄；细胞可疑污染；细胞已 经开始凋亡或崩解；连续培养超过二个月，细胞性状已有改变改变）
==> 最佳时机：细胞增殖旺盛，情况稳定，试验效果良好，复苏后两周内
2. 细胞太少：
冻存时细胞浓度低于1-5×1000,000/ml。（复苏很难成功）
==> 离心后调整细胞浓度。（不要重新洗细胞）
3. 盖子不紧：
冻存管的盖子一定要拧紧，否则复苏水浴时会渗水，造成污染。
==> 选择原配的管子和盖子（不同牌子/型号的颜色会有差别）
4. 单薄的冻存盒：
放在－80度的冻存盒，壁太薄，细胞在被迅速降温。
==> 选择厚壁泡沫塑料盒，或塞入大量干棉花。（冻存的原则：缓降！）
5. -80度太久：
放在－80度冰箱的时间超过半年。（冰箱的温度难以恒定:开门/关门，电压不稳等）
==>尽快转入液氮。
6. 液氮不足：
液面不能漫过所有细胞。
==> 定期测量液氮储备，保证细胞全部浸在液面下。
7. 取错细胞：
找不到/拿错冻存管。
==> 每支冻存管都标上细胞的名称，冻存时间，并记录在册。
[ 本帖最后由 NBA 于 2015-9-10 17:07 编辑 ]
