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标题:【求助】慢病毒转染

sunbent[使用道具]
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【求助】慢病毒转染

最近我在细胞转染的方面遇到瓶颈问题,各种化学转染试剂都不理想,老板打算换成病毒转染,可是我实验做了不少,可是从没接触过病毒,对病毒的转染一片空白,所以详情那位大侠指点一二,我目前有几个问题想咨询一下大侠们:
请问:1、凭经验而论,慢病毒转染细胞的过程中有哪些需要注意的
2、关键是拿到病毒之后,该怎么摸索MOI3、病毒穏筛的转染效率最高可达到多少?
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gmjghh[使用道具]
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1. 慢病毒感染目的细胞,需要在安全柜内进行操作,若实验室只有超净工作台的话,则进行病毒操作的时候需要关掉风机。另外,操作完毕后所有与病毒接触的枪头、EP管等废弃物需要84消毒液浸泡处理。
2. 拿到慢病毒后,一般用带荧光标记的慢病毒进行感染预实验,需要设置一系列的MOI梯度,比如可设置MOI 1~100,2~2.5 倍梯度就可以了。MOI摸索的时候在96孔板内进行就可以了,这样也可以省些病毒。细胞以合适的数目接种到96孔板内,根据你预设的MOI值及病毒的滴度值,计算出每孔需要加入的病毒量(可梯度稀释)。感染的时候大部分细胞需要加入polybrene以增强感染,你可以先网上查下你要做的细胞系感染时能否加入polybrene。
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dog002[使用道具]
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楼主,请问你开始做了不?我也想做慢病毒转染~~想包给公司做,又想自己动手~想问一下时间控制问题和经费问题~~
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sunbent[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 dog002 于 2015-9-11 15:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
楼主,请问你开始做了不?我也想做慢病毒转染~~想包给公司做,又想自己动手~想问一下时间控制问题和经费问题~~

开始也是打算自己包的,渐渐的发现自己包确实很费时,而且可能还达不到所需的病毒低毒,最后我们觉得包给公司做的,起码时间上会节省一些。呵呵,我也是刚准备开始做,以后在这方面可以交流交流
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qianqin1977[使用道具]
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楼主,我也在开始做慢病毒。我也是包给公司做的,现在在摸MOI,你现在做的怎么样了?有什么经验没?多交流...
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QUOTE:
原帖由 dog002 于 2015-9-11 15:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
楼主,请问你开始做了不?我也想做慢病毒转染~~想包给公司做,又想自己动手~想问一下时间控制问题和经费问题~~

我师兄让我包给公司做 我问了下 至少要3个月 费用嘛 两万七
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gogo[使用道具]
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不好意思,有段时间没来园里了,开始也是打算自己包的,渐渐的发现自己包确实很费时,而且可能还达不到所需的病毒低毒,最后我们觉得包给公司做的,起码时间上会节省一些。呵呵,我也是刚准备开始做,以后在这方面可以交流交流

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楼主你找哪家公司做的 我问了下上海吉玛
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veiwu[使用道具]
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2.7万,这么贵,楼主做的是什么啊,我们实验室在比昂生物做的慢病毒,也没有这么贵的啊,一般也就1万左右,我的RNAi才5000块钱。楼主问的哪个公司啊?
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gogo[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 veiwu 于 2015-9-11 16:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
2.7万,这么贵,楼主做的是什么啊,我们实验室在比昂生物做的慢病毒,也没有这么贵的啊,一般也就1万左右,我的RNAi才5000块钱。楼主问的哪个公司啊? ...

我问的上海吉玛 你说的一万块钱是做到哪一步 是你给他们细胞 他们给你的就是稳定表达的细胞吗 还是要自己筛选 我要公司做的是全套 包括后续的WB检测
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am10[使用道具]
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最近我在细胞转染的方面遇到瓶颈问题,各种化学转染试剂都不理想,老板打算换成病毒转染,可是我实验做了不少,可是从没接触过病毒,对病毒的转染一片空白,所以详情那位大侠指点一二,我目前有几个问题想咨询一下大侠们:
请问:1、凭经验而论,慢病毒转染细胞的过程中有哪些需要注意的
2、关键是拿到病毒之后,该怎么摸索MOI3、病毒穏筛的转染效率最高可达到多少?
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楼主你好,我也准备做转染,请问你之前是用什么方法做的?有没有试过lip2000?效果怎么样?
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