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十分感谢各位前辈!虽然现在细胞的状态还不是很好,我还没有确定是不是支原体的污染,所以我还是没敢随便用抗生素,打算做一个培养试试。
我养的细胞是IPE细胞,贴壁生长。据说这种细胞十分的脆弱,成活率很低。但是这么长的时间才贴壁还是前所未有的,而且本来很分散的细胞会有聚集成团的现象,这些都与支原体污染很相似。如果是支原体污染的话,我有几处怀疑的地方,大家可以作个借鉴:
1.试剂方面:
使用的培养基是进口的粉末培养基,就是直接加水(我们实验室用的是三蒸水)、调pH值、过滤后就能用的那种,但是因为要经过0.22的滤膜过滤,所以水没有经过高压灭菌,而0.22的滤膜是不能阻止支原体通过的,所以这一点让我非常怀疑;
胰酶是买的现成的,不存在配制时污染的问题;
血清是国产的优级胎牛血清,不需灭活,不知道信不信的过?而且加到培养基之前也用滤膜过滤了,
2.实验器材方面,培养瓶是一次性塑料的,而且是经过胶原处理的,其它器材也是经过高压灭菌的,估计应该没有什么问题。
3.实验操作方面:
这也是我怀疑的地方,虽然操作时该戴的都戴了,但是还是不能保证严格的无菌。比如手、袖口等。
4.材料的来源:
取材过程中的支原体污染。
以上是我能想到的污染途径,也许还有没有想到的,希望各位前辈指点。