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标题:【求助】PMA诱导THP-1图片

11_hjx[使用道具]
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发表于 2015-9-12 11:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】PMA诱导THP-1图片


实验第一步需要将THP-1用PMA诱导成巨噬细胞，参考师姐和一部分文献的方法，试过了96孔板，6孔板，还直接在培养瓶里加PMA刺激过，不知道哪位大神做过或者在做这个的，能不能给个图看看诱导成功之后的THP-1应该是什么样的，谢谢了
先上自己的


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发表于 2015-9-12 11:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

哇 我也在做这个 正在发愁哩
请问楼主 你在加PMA的时候1640是有血清还是无血清的？
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发表于 2015-9-12 11:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

加PMA和洗的时候都是用的无血清的1640
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发表于 2015-9-12 11:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
哦 多谢指点 我都是加了血清的哇
加了PMA之后细胞到是都贴壁了 但是形态都是圆圆的 没有伪足伸出来。。。可能就是这原因？
请问楼主为啥不能带血清呢？
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发表于 2015-9-12 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼主你PMA加了多久呢？
要是2-3天的话没血清 细胞会不会死了呢？
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发表于 2015-9-12 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

方法是祖传的，一是控制细胞生长，让细胞分化而不是增殖，也便于计数。而是延长细胞存活周期。以上解释基于祖传秘籍。但是我查到的文献也有加血清的，一般是5%的
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发表于 2015-9-12 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

lz你好 请教下 我也要做诱导THP-1的实验 你的THP-1细胞是用多大的培养瓶养的？PMA怎么加？加多少可以诱导成熟的巨噬细胞呢？谢谢
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发表于 2015-9-12 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用PMA诱导分化THP-1之前做过好就，细胞肯定会贴壁，但多数细胞都是还是圆的。
我的做法是，用DMSO配成1mM的溶液，用0.5ml的PCR 管分装，每管2.2ul，-80度保存
使用时，取2ul PMA（一次开一管），加入20mlTHP-1细胞悬液（我一般用250000个细胞/ml），混匀后用96孔板，每孔200ul。
第二天换一次培养液。第三天就拿来做试验了。
PS：我用THP-1做巨噬细胞吞噬，如果你们做别的东西，最好再参考下别人的方法。
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发表于 2015-9-12 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我加血清了啊，诱导的很好啊。应该是贴壁很紧，细胞梭形的多，也有圆形的。
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11_hjx[使用道具]
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发表于 2015-9-12 11:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

血清中的成分对我的实验有影响，所以不能加血清了。不知道是不是这个原因导致我的THP-1分化不够好，但是前人留下的记录看，不加血清一样可以变形，伪足倒是没见提起过，难道血清是伪足的必须？
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