PCR产量很低，弱弱的一条带，我怎么办？

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标题:PCR产量很低，弱弱的一条带，我怎么办？

coolcool[使用道具]
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发表于 2011-9-16 13:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

PCR产量很低，弱弱的一条带，我怎么办？ [转载]

七百多碱基，共50微升的反映体系，我取20微升上样，才看见弱弱的一条带，产量太低了，请教高手我该怎么办？

fangxiang[使用道具]
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发表于 2011-9-16 13:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

you can do pcr using the former diluted pcr products if your products is purify enough.

喵咪[使用道具]
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发表于 2011-9-16 13:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

换一种酶试试看。
或者看看加大循环次数是否有用。

格格巫[使用道具]
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发表于 2011-9-16 13:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

做个次级pcr：取你的pcr产物1uL做模板，另做一个体系扩增。

小葵[使用道具]
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发表于 2011-9-16 13:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

首先确定是否PCR体系可靠，如果用相同体系做其他PCR，例如管家基因都没问题，就要调整目前PCR的退火温度，并核对引物保存、模板是否可靠。

如果该PCR体系连管家基因等都拉不出，就重新换试剂吧，首先要考虑更换的是Taq 酶和dNTP。

个人意见：不主张用弱带纯化产物二次PCR，虽然第二次PCR条带大小相符，但实际序列是错误百出。这与用PCR 主带产物二次PCR是完全不同的。

再试试看，祝好运。

冷眼相对[使用道具]
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发表于 2011-9-16 13:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

肯定是你的体系有问题。PCR产物一般5微升就可以看见很亮的带了.你应该在摸一下条件。看看模板量，退火温度等，另外你的酶是什么？看看是不是在你的温度下他活性不好。你这么长的片段，还是用Pfu比较好，保真

韩梅梅[使用道具]
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发表于 2011-9-16 13:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

降低模板浓度！

babybabe[使用道具]
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