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标题:菌落PCR——求助

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发表于 2011-9-16 17:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

菌落PCR——求助

菌落PCR——求助 [转载]


之前做RT-PCR,一直没做出来，P出的是700左右的带，我要的是1500的。
问别人要了含有这个片段的质粒，换了个上游引物，然后做菌落PCR,P出的还是700左右的带，真的很奇怪。用的是Takara的La taq,GC rich buffer1,条件是
94 30s,55 30s,72 90s

会不会是我的下游引物有问题呢。
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发表于 2011-9-16 17:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你采用的引物是不是经过软件分析比较过？可以把序列和引物发上来，比较一下
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发表于 2011-9-16 17:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
把资料发的详细一点，这种情况不难解决的。
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发表于 2011-9-16 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
下午用48度复性，有一管做出来了。
挑的菌落真不能多
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发表于 2011-9-16 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
错配，提高退火温度。
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发表于 2011-9-16 17:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我把退火温度降到48度，就可以p出来了
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发表于 2011-9-16 17:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我把退火温度降到48度，就可以p出来了
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发表于 2011-9-16 17:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
应该提高退火温度,防止非特异  
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发表于 2011-9-16 17:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
什么叫菌落PCR，是以菌落的核酸为模板吗，怎么提它 的RNA啊
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发表于 2011-9-16 17:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不知道其他人是怎么做的，我是用消毒的牙签挑菌，在200ul水中沾一下，然后去5－10ul作模板，直接作PCR，不用提DNA。
不知道这个跟大家说的菌落PCR是不是一回事，我是用来作转化初步鉴定的。  
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