【求助】细胞克隆形成实验

细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】细胞克隆形成实验

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】细胞克隆形成实验

purrr[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 72864
精华 0
积分 362
帖子 384
信誉分 100
可用分 2786
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-15
状态离线

发表于 2015-10-15 11:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

相关疾病：
肺癌
最近在做肺癌A549细胞克隆形成实验，将100个细胞种在60mm培养皿里，培养2周，但细胞的克隆形成率低，大约10%，还没有做干预，而且培养皿容易污染。后又在6孔板里做，接种200－400个细胞，现在培养1周，很多细胞连接成片状，无法区分克隆，请问有做过这个实验的吗？盼指点。

xiaoxiaoniao[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 108878
精华 0
积分 509
帖子 677
信誉分 100
可用分 4049
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态离线

发表于 2015-10-15 11:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我是用六孔板做的 100个细胞足够当时50个细胞也做过大概10-14天即可染色数克隆了关键就是细胞量要合适这要自己摸索另外注意无菌常规换液即可关于结果统计可以参考一些权威文献

purrr[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 72864
精华 0
积分 362
帖子 384
信誉分 100
可用分 2786
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-15
状态离线

发表于 2015-10-15 11:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢你的指点，这10-14天需要换几次液呢？加入6孔板的培养基是多少毫升呢？

bojitu[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 118124
精华 0
积分 294
帖子 308
信誉分 100
可用分 2321
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-12-10
状态离线

发表于 2015-10-15 11:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

不知道战友解决了没有？我说一下我做的吧，我用的是H1975的细胞，使用的细胞数目为500个/3ml, 需要在无菌的大体积瓶内混好后再分别加入到6cm皿中，每三天换一次培养基。鉴于该细胞生长较快，第10天的时候我就停止了实验，大约有一半的克隆超过了50的数目，随后进行了固定染色和拍照。

greenbee[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 79370
精华 0
积分 710
帖子 1119
信誉分 100
可用分 6368
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态离线

发表于 2015-10-15 11:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 bojitu 于 2015-10-15 11:41 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

不知道战友解决了没有？我说一下我做的吧，我用的是H1975的细胞，使用的细胞数目为500个/3ml, 需要在无菌的大体积瓶内混好后再分别加入到6cm皿中，每三天换一次培养基。鉴于该细胞生长较快，第10天的时候我就停止了实验，大约有 ...

谢谢您提供您的经验。
请问您做的是平板克隆吧？
大于50个细胞的才可以称为克隆吧，染色后也是按照＞50个细胞来进行计数吗？
谢谢！
请不吝赐教！！！

yonger[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 74174
精华 0
积分 572
帖子 803
信誉分 100
可用分 4861
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-7
状态离线

发表于 2015-10-15 11:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

相关疾病：
胃癌
我最近做了两次，胃癌MGC803细胞克隆实验。6孔板内，每孔2000个细胞,2ml含10%FBS的DMEM培养基。两次均是种板后12小时有贴壁细胞，大于24小时观察有好多细胞碎片，不知道是什么原因？以后观察细胞成堆，或连续的细胞碎片。怎么成不了细胞克隆呀？请高手指点，谢谢！是操作原因吗？

yonger[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 74174
精华 0
积分 572
帖子 803
信誉分 100
可用分 4861
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-7
状态离线

发表于 2015-10-15 11:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

是含5%FBS的培养基。在37度，5%CO2培养箱中培养。

loli[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 71788
精华 0
积分 736
帖子 1171
信誉分 100
可用分 6650
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-31
状态离线

发表于 2015-10-15 11:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 purrr 于 2015-10-15 11:41 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

谢谢你的指点，这10-14天需要换几次液呢？加入6孔板的培养基是多少毫升呢？

2周内根本不要移动，何谈换液？