小中大【讨论帖】讨论
看过论坛内很多关于培养基ph值的调节问题,有一个比较统一的说法是:
PH值的调整可以通过hepes液和NaHCO3来调整,不能用HCl。
那么,真的不能用HCl来调节吗?
我觉得是完全可以的,理由是:
我购买gibco公司的dmem-f12培养基的使用说明书明确的写到:use of 1N NaOH or 1N HCl is recommended.
D-MEM/F-12, Gibco, 12400-024说明书(我做了简单的翻译,仅供参考):
1) measure out 5% less distilled water than desired total volume of medium, using a mixing container that is as close to the final volume as possible.
量出少于总量5%的蒸馏水
2) add powered medium to 15 to 30℃ (room temperature) water with gentle stirring. (Do not heart water).
加入干粉培养基,轻轻搅拌(不能加热)
3) rinse out inside of package to remove all traces of power.
冲洗包装袋 内壁
4) add 1.2 g of NaHCO3 per liter of medium.
加入1.2g碳酸氢钠(每升)
5) dilute to a desired volume with water. Stir until dissolved. (do not over-mix)
稀释至所需水量(轻轻搅拌,不要加过量了)
6) adjust pH of medium to 0.2-0.3 below desired final working*:use of 1N NaOH or 1N HCl is recommended.(add slowly with stirring). After pH has been adjuster, keep container closed until medium is filtered.
调节ph值(比最后要求的ph低0.2-0.3,因为过滤以后会上升0.1-0.3*pH units will usually rise 0.1-0.3 upon filtration),用1N氢氧化钠或者1N盐酸调节,)调好后封装避免灰尘。
8) sterilize immediately by membrane filtration. (positive pressure recommended).
立即用滤膜正压过滤
*pH units will usually rise 0.1-0.3 upon filtration
所以我觉得是可以的。
欢迎大家讨论,请给出操作的依据,谢谢!
附:
1N NaOH的配制方法(100ml)
4gNaOH溶于蒸馏水中,加水稀释至100ml
1N HCL的配制方法(100ml)
8.333ml浓盐酸,加水稀释至100ml
ps:NaOH要用烧杯称量,产热很厉害。要用容量瓶定容,容量瓶不能刷,不能烤干,得用无水乙醇润洗后挥发干燥,或者用吹风机冷风吹干。
(依据:化学课本和实验技术指导和化学老师)
第一阶段总结,欢迎大家继续讨论
已有结论:目前用于培养基Ph值调节的主要有1N NaOH、1N HCl、NaHCO3和CO2,其中还有少部分战友在配培养基的时候加入了hepes,并且这些调节都是在培养基过滤之前调节的,
依然存在的问题:上述的调节方法都是在培养基过滤之前进行的,对于培养基过滤以后使用期间的ph调节很少有人讨论,只有111ading和唐朝风韵两位战友提到:配1N HCL灭菌后进行调整,但是这两位战友并没有讨论是如何灭菌1N HCL的,和灭菌后如何保存及保存时限。
下一步期待:期待大家讨论一下培养基过滤以后的ph调节所用的溶液的配制方法,除菌方法,除菌以后如何保存,保存条件,保存的期限。
比如:除菌方法的讨论,首先是否需要除菌,然后再谈怎样除菌。如果不需要除菌,为什么,比如有人说1N NaOH、1N HCl就不需要除菌,原因是强酸强碱里面细菌无法生长,但是也有人比如111ading战友说配1N HCL灭菌后进行调整,需要灭菌,那么到底需要不需要呢,请大家讨论?
再比如:ph调节液该如何保存,最多可以保存多少天,在什么条件下保存,是4度冰箱还是室温,请大家讨论?
请大家继续讨论!!
第二阶段总结
第三阶段总结
祈祷中~~~