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标题:【讨论帖】MTT法和CCK-8法,那个好?

daod[使用道具]
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【讨论帖】MTT法和CCK-8法,那个好?


测定细胞毒性一直都使用经典的MTT法,近来同仁公司生产CCK-8试剂用于细胞毒性和增值测定,试剂介绍中比较了MTT法和CCK-8之间的优劣,不知道有没有人用过这两种方法,两个方法之间到底有什么不同,那个的精密度和准确度更高一些?
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moonlight[使用道具]
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请教:CCK-8是什么玩意儿?
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vvmmoy[使用道具]
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最近在做这方面的实验,查了一些资料,希望可以对楼主有所帮助。
Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒,是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
Ø WST-8是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。
Ø WST-8是MTT的一种升级替代产品,和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先,MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的,需要有特定的溶解液来溶解;而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的,可以 省去后续的溶解步骤。其次,WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次,WST-8比XTT和MTS更稳定, 使实验结果更加稳定。另外,WST-8和MTT、XTT等相比,线性范围更宽,灵敏度更高。
该方法已被广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞增殖试验、细胞毒性试验以及药敏试验等。
总之,CCK-8的原理跟MTT其实是相同的,不同之处在于CCK-8法生成的formazan是水溶性的,不需要再吸出培养液加入有机溶剂溶解这个步骤,因此可以减少一定的误差。其他优点就是重复性优于MTT;对细胞毒性小;为1瓶溶液,毋需预制,即开即用。
但是CCK-8比MTT的价格要贵不少,所以一般来说,还是MTT法用的多。
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同仁化学有CCK-8 不过还是MTT便宜啊
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同仁化学有CCK-8 不过还是MTT便宜啊
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HP007[使用道具]
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CCK-8做细胞毒性实验,就很方便,加了CCK-8之后,过1-4小时后就可以直接读数,MTT加了之后,继续培养4小时,还要加DMSO溶解。CCK-8是MTT的优化版,都可以用。所测的结果是一致的。
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提供公司的网页给大家参考:cuturl('http://www.dojindo.cn/productd.asp?pd=82')
我也是做MTT屡受挫折,准备改用其他方法,也关注过CCK-8,不过后来定了罗氏的LDH试剂盒,晶美代理的,3800多啊,心疼中!
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定过PROMEGA的LDH,现在可能要1800,也比较贵,不过可以做10块板,稳定性稍稍比MTT好一些。罗氏的是不是比较好,价格这么贵?
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Darcy[使用道具]
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cck-8比mtt操作起来更方面,对于毒性测试,cck-8比mtt好很多,因为cck-8不破坏细胞,所以不影响实验。
悬浮细胞,操作时不需要离心,也就不会带走细胞
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iii_ii[使用道具]
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不知道cck-8 有没有便宜一些,看到上海的一个公司,一个板需要300多,有点太奢侈
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