谁能抽空回答我两个问题?

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标题:谁能抽空回答我两个问题?

碧空子[使用道具]
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发表于 2011-9-20 14:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谁能抽空回答我两个问题? [转载]

1，Nonsense-mediated dacay(***)中文是什么意思，能给解释一下吗？
2，我回收的DNA片段在做聚丙烯酰胺电泳时在加一个样时它总是向上漂不能进入加样孔，是不是混了什么东西，该怎么处理？另外，我加20ul的样可是仍没跑出带来，原因何在？（我的回收样品总共100ul）

麻瓜[使用道具]
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发表于 2011-9-20 14:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

用google搜索一下试试，可能会有意想不到的效果！

+田田+[使用道具]
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发表于 2011-9-20 14:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

^_^，回收样品竟然高达100ul，从多少点样中回收的呀！你没测测回收浓度吗？向上漂，多加上样缓冲液，怎么也不会漂的，关键是你到底有没有咚咚。。。。。。。。。。
Nonsense-mediated dacay(NMD)敲错一个字母吧！！！！！！！！！NMD - Nonsense mediated mRNA decay可以向搞RNAi的继续请教。。。。。。。

Global Effect of upf mutants
--------------------------------------------------------------------------------
Search NMD Database

冰激凌小姐[使用道具]
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发表于 2011-9-20 14:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

上样缓冲液比TBE比重大，怎么会漂呢？！

森林木[使用道具]
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发表于 2011-9-20 14:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

加样时加入正确的loading buffer是应该没问题的。2ul回收的DNA就足够了。
若仍然跑不出带，说明你纯化的DNA有问题。

冷太阳[使用道具]
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发表于 2011-9-20 14:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也搞不清楚，我用1xTBE的， loading buffer 应该没问题我用pcr扩增产物就没问题。我又做了一边回收，测了浓度278.5ng/ul，可是加样又出现了这个问题。快帮我想想，谢谢各位了

+田田+[使用道具]
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发表于 2011-9-20 14:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

哦，对了，聚丙烯酰胺电泳加样孔要先吹打几下以防有残余其它未聚合的物质，但是这个应该不是最大的问题。既然浓度为278.5ng/ul，一般的琼脂糖电泳也可以啊！如果只是为了检测一下，跑个琼脂糖电泳步就可以了吗，省得麻烦，除非这一步你有其他用途。。。。。。。。？我也是凭自己的一面之词，具体你的实验情况我也不太清楚，仔细检查一下，再试试。

海鸥crazy[使用道具]
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发表于 2011-9-20 14:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

是不是你PCR矿物油的问题啊？做PCR后是不是加矿物油，如果加的话，可能就是问题所在，我以前做PCR时候也遇到过类似问题，点样时候（琼脂糖电泳），多加上样缓冲液也可能不太起作用，主要是不要把矿物油也加在上样缓冲液中。

碧空子[使用道具]
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发表于 2011-9-20 14:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

非常感谢大家：）
我用的是回收试剂盒,开始加样上飘时,我以为是离心转数不够,严格按回收试剂盒转数操作后,有时飘有时不飘;我还对回收样品用苯酚/氯仿/异戊醇和氯仿/异戊醇提纯后再加样也不上飘，我很困惑，很想搞清楚为什么？

@花开花落@[使用道具]
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发表于 2011-9-20 14:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

飘样与无带！

PAGE电泳如果你做的是变性胶，记住：点样前一定要用胶头滴管冲洗几下点样孔，否则析出的尿素是不会让你把样点进去的。不管你如何调整你的上样BUFFER。如果你的样比较多，在后面点样的时候还的重新冲洗。
另外，点样时还不能太急噪，要慢，慢了以后还要慢。
点样量也不要太多，多得你的点样孔都装不下也不好嘛！

不出条带的问题多半是出在染色与显影的过程中（如果你是做的银染的话）。仔细检查不会有问题（在你的样品没有问题的情况下）。

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