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标题:【求助】puromycin 筛选浓度

sunbent[使用道具]
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发表于 2015-10-20 10:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】puromycin 筛选浓度


相关疾病：
结肠癌

各位老师
我现在用构建shRNA干扰载体，慢病毒包装，感染结肠癌细胞株，puromycin 筛选稳定感染的细胞（载体没GFP基因），想请问各位老师，感染后多长时间加药？你们筛选的浓度是多少？筛选多长时间？谢谢！
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lorri[使用道具]
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发表于 2015-10-20 10:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 sunbent 于 2015-10-20 10:34 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

相关疾病：
结肠癌

各位老师
我现在用构建shRNA干扰载体，慢病毒包装，感染结肠癌细胞株，puromycin 筛选稳定感染的细胞（载体没GFP基因），想请问各位老师，感染后多长时间加药？你们筛选的浓度是多少？筛选多长时间？谢谢！ ...

你好，最近我也在做puromycin 筛选稳定感染的细胞株的预实验，请问你筛出来的浓度是多少？筛的时间是多长呢？
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sunbent[使用道具]
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发表于 2015-10-20 10:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 lorri 的帖子

我还没开始筛呢。。。呵呵
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发表于 2015-10-20 10:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
怎么样，我也要做。也是没有GFP的，请问你们怎么做的，能联系你嘛？
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发表于 2015-10-20 10:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有人做了吗？推荐下致死时间和浓度吧。分享、分享！！
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发表于 2015-10-20 10:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

都没有答案呀，看样子还是得自己老老实实的做杀伤曲线确定了。
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发表于 2015-10-20 10:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

2.5ug/ml 0.5ug/ml 不等~
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sunbent[使用道具]
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发表于 2015-10-20 10:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
相关疾病：
puro毒性挺大，1ug/ml 肠癌细胞24h就死完了，感染72h后，直接加2ug/ml puro筛选克隆应该没问题，我筛选到5ug/ml细胞都能活着好好的。
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发表于 2015-10-20 10:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也在做这个的筛选试验，是在肝癌细胞系上。但我的0.5ug/ml的浓度，细胞可以活，但是一直长不起来，都5天了，还是稀稀疏疏的。
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发表于 2015-10-20 10:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最近也在做puro筛选，不知道加药晒讯多长时间合适？有没有前辈可以指导一下？
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