食品分析者

今天做了多糖抗氧化测DPPH的实验，问题很多：
1、DPPH用无水乙醇溶的，然后实验出现了絮状沉淀。
2、空白组吸光度超过了1。
3、加了多糖样液的部分样品吸光度超过了空白。

多糖制备的时候是用醇沉的，多糖不溶于醇，DPPH又是用无水乙醇配的，正常情况下是会沉淀的吧？？？有没有办法解决这些问题呢？？？求教大神们了，很急啊！！

我也有用DPPH自由基来测样品的抗氧化能力，浓度为0.1mM的DPPH无水乙醇溶液在517nm下吸光度是0.9以上，所以不加抗氧化剂的空白对照中DPPH的浓度为0.1mM较好。我是用0.2mM的DPPH溶液和待测样品同体积混合。针对你的问题：1 出现絮状物应该是溶解问题：可能你的糖提取液跟DPPH溶液不能混溶，也可能反应产物不能很好溶解，还可能。。。；2 浓度为0.1mM的DPPH无水乙醇溶液在517nm下吸光度由于仪器、参比等客观条件也可能会大于1，我实验数据也有稍大于1的；3吸光度大于空白，可能是因为你体系形成的絮状物造成的干扰，原则下，分光光度法要求待测液是溶液（也就是要澄清透明的）。希望对你有帮助。

你的样品是用醇沉的，所以我觉得你可能不适合用DPPH这个方法测量，因为DPPH要么用甲醇溶解要么用乙醇溶解来制备，不知道你换成甲醇还会不会出现这个问题。考虑乳化剂是一个解决的办法，我见过的有SDS的，环状糊精的，也有你说的DMSO的，如果还用分光，波光应该还是原来的波长，因为原理是没变的，不放心的话，做个波长扫描就行了，很方便的；另外，你可以考虑看能不能更换样品的溶剂，比如丙酮。如果都不行的话，可以考虑换方法啊，测清除自由基能力的方法很多的，不一定局限于这一种。

DPPH浓度是0.2mM，感觉应该用0.1mM的
多糖是粗品，不过感觉吸光度反而大了是由于产生了沉淀
不知道是不是这样呢？？

不知道你是不是要用vc做标曲，如果你这三个浓度的清除率都是90%多，那说明较低浓度的VC的时候基本就把自由基清除差不多了，所以你可以考虑把浓度继续稀释，具体浓度，你试吧。

絮状沉淀应该是多糖吧，多糖不是水提醇沉么呵呵，空白组超过1，是不是因为你dpph浓度过高呢？加了样品的吸光度超过空白？那可能是你多糖不纯的，是不是里面参杂了别的色素之类东西呢......

我也遇到过这事由于糖浓度过高的原因，你把浓度降低就ok啦

糖浓度过高吧，浆浓度降低即可。

打算降低浓度做  不过实验室师兄说我糖液加得太多了，我是糖液和DPPH体积1:1做的，好多文献也都是1:1的，不知道是不是应该把糖液体积少加点呢？？

是的呢，样液在醇里溶解性很差，我试过把糖浓度降到0.4mg/ml，在2ml乙醇里加入200微升糖液也沉淀了。。
看到论坛里有说用CMC乳化剂的，但是找不到相关的文献。。。
还有用DMSO溶解DPPH的，但是那个好像基本是用液相做的，不知道如果用分光光度计的话波长应该多少呢。