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标题:DNA用什么方法定量最准确 ？

莓菓333[使用道具]
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发表于 2011-9-21 12:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

DNA用什么方法定量最准确 ？

DNA用什么方法定量最准确 ？[转载]


我从1ml人全血抽提的DNA用紫外分光光度计定量，发现每次读数都不一样，因为抽提出来的DNA大概只有3-5微克，每次定量时还要稀释，所以每次算出来的量差距很大，本来是为PCR模板定量，但如此就很难实现，我的一个同学作RT-PCR也遇到这个问题，如果抽提出来的RNA都很难定量，那最后估计出来的初始模板量如何能准确呢？不知哪位专家知道，望赐教。
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韩梅梅[使用道具]
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发表于 2011-9-21 12:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
定量的基础不是核酸的量而是选择一个内参照
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莓菓333[使用道具]
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发表于 2011-9-21 12:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有内参照，只能定作RT-PCR时模板的量，但初始抽提出来的mRNA表达量如何确定
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韩梅梅[使用道具]
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发表于 2011-9-21 12:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
分光光度计测OD260，可计算mRNA的量  
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发表于 2011-9-21 12:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一个非常简单的方法，制一块平皿胶，将标准样品倍比稀释后，滴在上面。将样品DNA滴在上面，放置15分钟。紫外灯下观察。（此板可放于4度一个月）。  
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发表于 2011-9-21 12:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也遇上这个问题，我需要提取血中的DNA通过分光光度仪来定量DNA，从而推算细胞数作为定量PCR的模板，而我每次同样量的血做的结果都差一两个数量级，怎么办？怎么处理 ？
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红豆冰[使用道具]
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发表于 2011-9-21 12:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
再问你一个问题，你是从全血细胞还是单从白细胞中提取
DNA，你是用自己提取还是用买的试剂盒？
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发表于 2011-9-21 12:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也有同样的问题,从全血或白细胞中用生工的纯度1.0附近这么低和V-GENE的产品纯度>2.0,生工的产品换过PROTEIN K后结果还是这样,叫人着急啊
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不懂[使用道具]
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发表于 2011-9-21 12:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也遇上这个问题，我需要提取血中的DNA通过分光光度仪来定量DNA，从而推算细胞数作为定量PCR的模板，而我每次同样量的血做的结果都差一两个数量级，怎么办？怎么处理

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紫外分光光度定量对於定量PCR是不合适的。而且你需要内参!
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白鸟之翼[使用道具]
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发表于 2011-9-21 12:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我知道紫外分光光度定量对DNA定量是不准的，可是只要做为我们这批实验的共同模本以它为标准品画标准曲线，来测某基因的相对拷贝数，同时与正常相比，可以吗？
你说的内参是不是管家基因，主任？
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