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没看明白,我的问题是:
1。你蛋白挂柱后不经任何处理,直接收集的馏分是指蛋白样品加入到柱子里后流出来的液体么?蛋白结合到柱子里了,流出来的液体本来就不应该含有目的蛋白呀。没有蛋白当然也检测不到活性呀。
2。你后面的洗脱及透析都做了是吧?有没有发现沉淀呢?
3。还有蛋白对盐浓度敏感么?挂柱子前的cell-free体系是怎样的溶液?洗脱蛋白后,用cell-free体系置换你的洗脱溶液体系,看洗脱蛋白在挂柱前应该有活性的体系里还有没有活性。
4。挂柱前的蛋白溶液和洗脱后的溶液泡个page胶看看,不加SDS,看看洗脱后的蛋白条带和洗脱前是不是在同一位置。如果是,蛋白就是单体了,如果不是那就考虑是多聚体了,或者是需要一些辅助因子之类的。