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离子交换层析吸附蛋白质是依靠配基与蛋白质结合的,如果填料装填紧密,那么蛋白质会立即与空位的配基结合而被吸附,如果上柱洗脱得不集中,可能是填料装填得不紧密,蛋白质在填料的空隙走空,未能与配基接触。
层析柱能吸附的蛋白质量与蛋白质样品的体积无关,只与蛋白质含量有关,理论上只要蛋白质不超过配基量即可,所以蛋白质样品体积与层析柱体积没有必然关系。我用柱床体积为20毫升的预装柱吸附过体积为350毫升的蛋白质样品,而淀粉酶不在穿透液中,全部在洗脱液中,原因就是层析柱的配基能全部吸附淀粉酶,无视样品体积。
PEG是线性分子,会在层析柱中残留,引起堵塞。我用过PEG4000,结果残留了一半,使得层析柱反压升高,所以我建议不用PEG来浓缩。而且说不定会影响酶活力。