小中大请教：1. 做半定量RT-PCR,是同管扩增还是异管扩增更被认可？
2.对人的正常和病变组织，是选择b-actin 还是GAPDH?
3. 因为目标基因是自己设计和引用文献的的，b-actin买的成品，没考虑是否有引物间的干扰。但同管能把两者都扩出来，是否还要再查一下的序列是否相互形成二聚体呢？
请各位高人指导。
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你的这些问题很多资料都有说明，包括权威的nature,science等，其实做半定量目前最值得看好和推崇的方法就是自己做内参，不要看家基因做，主要原因是考虑到所有的看家基因，包括你说的b-actin ，GAPDH，还有28S RNA都存在不同条件表达量会改变的结果，有几篇文献都描述了这几种看家基因作为内参的特点，比较了其优缺点，倒是大家都很推崇28SRNA它的“稳定”性！
刚才说了，自己做内参已经不是什么新鲜的事了，2001，02就有这样的文章发表了，这样的做法可以排除管与管间的差别，也能排除引物与引物间的差别，因为这种方法采用的竞争性的模板，用的是相同的引物，在同一个管内进行！这样的一个方法基本上不存在你问的问题！：）
这个方法相对比较麻烦一点，做的东西多一些，你实在不想这样做，也没所谓的，还是照老方法做吧，我想同管和异管都曾经实施过，你看看资料吧！
半定量不是很准，因为最终要确定还是要依赖Nothern!
