小中大各位战友好!
PCR 引物很是奇怪:引物干粉溶解了,刚开始使用时,可以扩出特异条带,达到所需目的。然后逐渐就不行了,越来越差,直至扩的是SMEAR。怀疑引物降解了,就放下不用它,另合成新的。可原引物放置一段(4度下)时间后,却再次能使用了!!与人交流时才知道,这种问题还不是我一个人遇到。同仁做突变体库,使用大量特异和简并随机引物,对同样的某些引物而言,一段时间内用得很好,一段时间却尽扩出SMEAR,这段时间,他们痛苦得不得了!
到底是什么原因?引物合成的问题吗??为什么引物象病人样,时好时坏?
================================================================================================================
PCR出现重复性不好,怎么能都怪引物呢,引物合成一般是不会有问题的,也可能会有问题,但是可能性确实太小了,重复性怎么样主要是看你的退火温度的选择,体系的组成,模板的质和量,而不是引物。
引物干粉,在4度可以放很长时间,半年以上不会有问题,如果是已经融了的引物4度两个月不会有问题。
寻找PCR出现这些问题的原因放到其他方面吧,最主要的是体系和退火温度。不要放到引物上。