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标题:我的MARKER为什么跑不开？

过路甲[使用道具]
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发表于 2011-9-23 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的MARKER为什么跑不开？

我的MARKER为什么跑不开？ [转载]


用的是1%的agarose，但是基本聚在了一起
后来换了2%的agarose，稍微好了一些，但是还是分的很不理想

我用的50V电压，胶是5CMx5CM的大小

后来同样的marker我用PAGE跑了，分离的很清晰

所以问问到底是什么原因呢？

BTW，MARKER是鼎国的SD011，最小片段60bp，大的是800bp，这样的范围
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blueeye[使用道具]
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发表于 2011-9-23 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
鼎国的Marker我用过，感觉不太亮，建议用Takara的，稍微贵点，但是值。
我觉得跑不开可能与琼脂糖的质量有关，用日本分装的的并不好。我用Yoto(上海代理)的觉得很好，均匀且有一定的强度。另外小片段本来就不容易跑开，除非你跑得时间长，但是将常有容易变的不清晰，建议可将电压调大一些如100V，20－30min 基本可以，另外如果是小片段容易与引物带混淆，所以PCR时引物不要多加。
只是一点拙见，不妥之处见谅
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发表于 2011-9-23 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
小分子量的marker要用浓度较篙的AGROSE, 2% agrose 1*TBE 5-10ul EB 5*5的胶50伏电压 20-30分钟,试试吧,我的marker50--800bp就是这么出来的  
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发表于 2011-9-23 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉得是电压太小了
另可以用较小浓度的胶
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发表于 2011-9-23 11:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
觉得是电压太小了
另可以用较小浓度的胶

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浓度再小一些？那区分度不是就更差了么？
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发表于 2011-9-23 11:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
小分子量的marker要用浓度较篙的AGROSE, 2% agrose 1*TBE 5-10ul EB 5*5的胶50伏电压 20-30分钟,试试吧,我的marker50--800bp就是这么出来的

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您和我的体系是一模一样的，我的就是出不来，每个带就隔开将近2mm
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发表于 2011-9-23 11:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
鼎国的Marker我用过，感觉不太亮，建议用Takara的，稍微贵点，但是值。
我觉得跑不开可能与琼脂糖的质量有关，用日本分装的的并不好。我用Yoto(上海代理)的觉得很好，均匀且有一定的强度。另外小片段本来就不容易跑开，除非你跑得时间长，但是将常有容易变的不清晰，建议可将电压调大一些如100V，20－30min 基本可以，另外如果是小片段容易与引物带混淆，所以PCR时引物不要多加。
只是一点拙见，不妥之处见谅

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我用的鼎国的这批MARKER还是比较亮的，我以前跑PAGE时，加0.8uL就很亮了。这次AGAROSE时，也很亮，但是聚在一起，真是ft啊

琼脂糖的质量我考虑再换换，高电压跑跑看，呵呵，多谢多谢
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发表于 2011-9-23 11:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
肯定是琼脂糖的问题，换一种试一下。电压没必要那么低。
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发表于 2011-9-23 11:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
肯定是琼脂糖的问题，换一种试一下。电压没必要那么低。

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好的，多谢拉，但是有一点不明白的是

以前这个AGAROSE是好的，怎么放了半年，也没受潮，就不行了，真是ft
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发表于 2011-9-23 11:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
re：
鼎国的Marker我用过，感觉不太亮，建议用Takara的，稍微贵点，但是值。
takara的里面加了eb的
各位小心了
我们也是去年才发现
体系不加eb就很亮
一定不要弄手上了
该死的小日本  
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