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标题:提取组织样品中的病毒DNA

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发表于 2011-9-24 08:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

提取组织样品中的病毒DNA

提取组织样品中的病毒DNA [转载]


今天一天都没吃肉,主要因为上午做了4个组织样品的核酸提取前处理.
差点晕死了,样品是在-20度冰箱里保存的前年的可疑组织病料,刚拿出来还好,一会儿就受不了了,我用的是一个食品DNA提取试剂盒,1克样品要加2毫升BUFFER,结果我的样品一个也有10克,眼看试剂盒里的试剂都要见底了,我就没做了
请教:有用于大量临床样品病毒DNA提取的试剂盒吗?
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发表于 2011-9-24 08:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
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发表于 2011-9-24 08:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
几乎都是用于血液样品的DNA提取,还有一个是用于小剂量组织DNA的提取,我的样品太多了,不知该怎麽办

Genomic DNA Stabilization and Purification from Clinical Samples for Research Applications
Collection, stabilization, and DNA purification

Blood, collection and DNA stabilization
PAXgene Blood DNA Tubes

Blood, DNA purification
PAXgene Blood DNA Kit


Blood, collection, DNA stabilization, and purification in one system
PAXgene Blood DNA Validation Kit




Genomic and viral DNA purification from blood and blood-derived samples

Blood and cell-free body fluids, spin-column format
QIAamp DNA Blood Mini Kit
QIAamp DNA Blood Midi Kit
QIAamp DNA Blood Maxi Kit

Blood, flexible starting volumes, genomic DNA only
FlexiGene DNA Kit

Blood and blood-derived samples, 1–6 samples in parallel, automated
EZ1 DNA Blood Card
EZ1 DNA Blood 350 ul Kit
EZ1 DNA Blood 200 ul Kit

Blood, up to 48 samples (100–200 µl) per run, automated
MagAttract DNA Blood Mini M48 Kit


Blood, up to 48 samples (250–350 µl) per run, automated MagAttract DNA Blood Midi M48 Kit
Blood, 96-well format
QIAamp 96 DNA Blood Kit

Blood, 96-well format, automated
QIAamp DNA Blood BioRobot MDx Kit
QIAamp DNA Blood BioRobot 9604 Kit
MagAttract DNA Blood M96 Kit

Very small amounts of blood, tissue, and forensic samples, minimal elution volumes QIAamp DNA Micro Kit
Dried blood, 1–6 samples in parallel, automated EZ1 DNA Dried Blood Card
EZ1 DNA Tissue Kit
Buffy coat, 1–6 samples per run, automated
EZ1 DNA Buffy Coat Card
EZ1 DNA Blood 350 ul Kit


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发表于 2011-9-24 08:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
Genomic and viral DNA purification from tissue and other clinical samples

Clinical tissue samples, spin-column format QIAamp DNA Mini Kit
Clinical tissue samples, 1–6 samples in parallel, automated
EZ1 DNA Tissue Card
EZ1 DNA Tissue Kit


Clinical tissue samples, plus a wide range of other human samples, up to 48 samples per run, automated MagAttract DNA Mini M48 Kit
Clinical tissue samples, plus a range of biopsy samples, up to 96 samples per run, automated MagAttract DNA Tissue M96 Kit
Swabs, 1–6 samples in parallel, automated EZ1 DNA Buccal Swab Card
EZ1 DNA Tissue Kit
Swabs, 96-well format, automated QIAamp 96 DNA Swab BioRobot Kit
Forensic samples, 1–6 samples in parallel, automated
EZ1 DNA Forensic Card
EZ1 DNA Tissue Kit


Paraffin-embedded samples, 1–6 samples in parallel, automated
EZ1 DNA Paraffin Section Card
EZ1 DNA Tissue Kit


Stool samples
QIAamp DNA Stool Mini Kit

Very small amounts of blood, tissue, and forensic samples, minimal elution volumes QIAamp DNA Micro Kit



Bacterial and parasite DNA purification

Blood and cell-free body fluids QIAamp DNA Mini Kit
Very small amounts of blood and related body fluids, minimal elution volumes QIAamp DNA Micro Kit
Stool samples
QIAamp DNA Stool Mini Kit
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发表于 2011-9-24 08:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
Viral DNA purification


Cell-free body fluids, spin-column format
QIAamp UltraSens Virus Kit

Plasma, serum, and cell-free body fluids, minimal elution volumes QIAamp MinElute Virus Spin Kit
QIAamp MinElute Virus Vacuum Kit
Cell-free body fluids, 96-well format, automated
QIAamp Virus BioRobot MDx Kit
QIAamp Virus BioRobot 9604 Kit




Total nucleic acid purification


Cultured cells and blood, 1–6 samples in parallel, automated
EZ1 RNA Card
EZ1 RNA Cell Mini Kit

Cultured cells and blood, up to 48 samples per run, automated MagAttract RNA Cell Mini M48 Kit



Robotic systems for clinical research
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发表于 2011-9-24 08:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果非要大量提取的话，建议你别用试剂盒了，买点蛋白酶K，饱和酚等手工提吧。这么大量提取用试剂盒反而不如手工提得率高、效果好的。
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 小中大
大量提取是最好用自己配的试剂了。

病毒一定要灭活的。

蛋白K消化3小时就够了，浓度可以高点。后面再用酚处理。

你可以用盐沉淀的方法，蛋白K消化后加入0.2M NacL（终浓度）.斡旋后离心取上清，下面是蛋白沉淀。

可以看看分子克隆书，上面游些。
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发表于 2011-9-24 08:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
非常谢谢两位的帮助,我今天就去翻一下书,配试剂
我又想了个办法,研磨组织,然后反复冻融,先低速然后超速离心,沉淀病毒离子,然后再提取,是不是可以节约试剂呢?
请教一下!!有没有可行性!
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韩梅梅[使用道具]
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发表于 2011-9-24 08:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
没有做过，但应该可行。一般做病毒培养时是这样收毒的。不过培养时细胞量很少的，你的组织至少10g，工作量仍然不小，可以先做一份试试看。
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小蜜蜂[使用道具]
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 小中大
问一下，为什么非用这么大的样品呀？10g,太大了。  
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