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标题:请大家看看我的第一次ｒｎａ电泳，能否作ｒｔｐｃｒ？

冰儿0109[使用道具]
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发表于 2011-9-24 13:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请大家看看我的第一次ｒｎａ电泳，能否作ｒｔｐｃｒ？

请大家看看我的第一次ｒｎａ电泳，能否作ｒｔｐｃｒ？[转载]


这是我第一次用ｔｒｉｚｏｌ提的培养肿瘤细胞的ｒｎａ，
请大家看看我的第一次ｒｎａ电泳，是降解了吗？dna污染了吗？能否作ｒｔｐｃｒ？？（我标的18s，28s不知对不对？）请大家指导！！
谢谢！！


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2011-9-24 13:12
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阿福[使用道具]
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发表于 2011-9-24 13:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的主带不清楚，要么重跑一次，要么重提  
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冰儿0109[使用道具]
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发表于 2011-9-24 13:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问是28s "主带不清楚"吗？？？？
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发表于 2011-9-24 13:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
偶的一点看法：
1、DNA污染严重，在加样孔边上一坨的就是它了
2、我不知道你的胶浓度，但依我的经验，好像把条带标错了，18s和5s实际上分别是28s和18s，图中应该没有5s，而你标的28s是什么我也不知道
3、主带虽然不是很清除，但RNA降解不太厉害，作为提RNA的新手，完整性还说得过去
4、电泳时间有点长了，下次跑RNA电泳的时候的时间短一点，这样更利于判断RNA的完整性

以上为本人拙见，仅供参考
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jude[使用道具]
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发表于 2011-9-24 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
补充一点：
能否作rtpcr要看你的目的和目的基因的丰度，一般的基因应该没有问题的，做一个定量/半定量也还行，但如果还有组织或者细胞的话，建议你重提
DNA污染：吸取水相时注意不要吸到中间的白色的东西，那里面有大量的DNA和蛋白，刚开始的时候，宁可少吸一点
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冰儿0109[使用道具]
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发表于 2011-9-24 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
胶浓度是1%，1倍的tbe，上扬液 是甘油，二甲苯氰，溴芬兰，
大约5×106 个细胞提取的总rna，加了15uldepc水，取了2ul跑电泳。。
另外问一下是不是甲一些dna酶i 可以减少dna污染，dna污染对rtpcr影响大步大？？？  
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8黑眼圈8[使用道具]
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发表于 2011-9-24 13:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1.电泳时间长了，RNA跑出孔就行了
2.条带标记没有错，28S不清楚，而5S较清楚，考虑RNA降解
3.可能有DNA污染

建议：重新电泳，缩短电泳时间，如果结果依然，建议重提RNA。
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冰儿0109[使用道具]
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 小中大
我想rna讲解，可能是电泳时间太常了把？？？
因为电泳液是新配的，电泳槽也是新买的，按分子克隆处理的。。
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发表于 2011-9-24 13:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
rna降解可能没有那么快,我曾经取3ul电泳15分钟后停止,停了3,4小时接着电泳,条带并没有分散,仍很清楚.你的电泳时间应该不会很长.如果做RT-PCR建议一试,加大模板量,延长逆转录时间,很可能会出条带.作为新手,成功一次的喜悦是不言而喻的.做不出也无所谓,关键是先熟悉操作流程,耽在一个环节,可能会浪费时间.
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森林木[使用道具]
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发表于 2011-9-24 13:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢大家,这是20min的照片,请大家指导!!!


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