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标题:【求助】病毒RNA的提取

蒲公英[使用道具]
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发表于 2015-11-7 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】病毒RNA的提取


哪位高人做过病毒RNA的提取？也可以用Trizol来提取吗？如果做提取后做病毒RNA的电泳，有什么要注意的吗？电泳后的图片应该是怎样的呢？
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小鱼鱼[使用道具]
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发表于 2015-11-7 11:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
应该是可以的，我提过病毒的RNA,不知道你是哪种病毒，建议你用浓缩的病毒液来做，这样RNA的浓度可以高些；但是电泳不一定能看得到条带，电泳之后条带的位置要看你病毒基因组的大小了，不知道我说又没有道理，仅供参考。
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蒲公英[使用道具]
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发表于 2015-11-7 11:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

怎样得到浓缩的病毒液啊？能把你提取过程的具体操作步骤告诉我吗？
我的RNA跑的电泳什么都没有显示．我的标本是病人的咽拭子，我该怎么处理得到病毒RNA呢？
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二丫头466[使用道具]
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发表于 2015-11-7 11:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

建议提取RNA后，有条件就先测一下ＲＮＡ的浓度．以微量核酸定量仪．如有，再跑ＰＡＧＥ胶电泳．
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蒲公英[使用道具]
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发表于 2015-11-7 11:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的标本量实在太少了，要测它的浓度恐怕不太可能．
请教：怎样得到浓缩的病毒液啊？能把你提取过程的具体操作步骤告诉我吗？
我的RNA跑的电泳什么都没有显示．我的标本是病人的咽拭子，我该怎么处理得到病毒RNA呢？
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了了[使用道具]
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发表于 2015-11-7 11:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的病毒RNA的是单链还是双链的
看要求而定
提总RNA
我也用过Trizol
效果不错
但我要的是双链RNA
采用浙大周雪平的方法
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orangecake[使用道具]
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发表于 2015-11-7 11:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我给你一个英文版的提取病毒的方案吧，是我的美国导师提供，自己认真看，认真琢磨每一步很重要。这个是在粪便悬液中提取病毒，病毒量也很少，和你的情况相似。
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发表于 2015-11-7 11:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
它里面的BSA (1%)和P 289 H, I 分别是什么东西啊．
RT以后的PCR反应体系不需要再加dNTP了吗？
受益非浅啊，本来我都是把咽拭子的洗液离心,获取的细胞来用Trizol抽提RNA的，但细胞数实在太少，很不理想，我这两天就用你提供的方法来提一下病毒RNA试试，多谢了！
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Darcy[使用道具]
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发表于 2015-11-7 11:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

TRIZOL可以，QIAGEN公司提病毒RNA的试剂盒也行。我曾经用TRIZOL和QIAGEN公司提病毒RNA的试剂盒直接从血清中提病毒RNA做RT-PCR扩增病毒基因，结果OK。
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蒲公英[使用道具]
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 小中大
我试着用Trizol提过，可结果测OD为０，RNA电泳一片空白，郁闷啊！
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