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标题:【求助】25ul体系和50ul体系对pcr结果影响大吗？

IAM007[使用道具]
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发表于 2015-11-10 11:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】25ul体系和50ul体系对pcr结果影响大吗？


我现在做小鼠肾皮质TGF-beta1的rt-PCR,由于组织提取比较麻烦，我想用25ul体系摸条件，摸好后用50ul体系pcr,不知可行否？请园中侠客参谋一下，谢谢！
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发表于 2015-11-10 11:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还是有50ul的，这样反应体系比较稳定。
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xiaoxiaoniao[使用道具]
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发表于 2015-11-10 11:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

在计算好试剂加入量的情况下,使用25ul的体系可以节省模板和其他试剂.可以做预实验使用摸体系.
前提是:
1.要使用精确的微量加样器.(0.1~2ul)
2.操作标准娴熟.
2.PCR仪具有很好的随体系大小控温系统,推荐使用大品牌.
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duchy[使用道具]
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发表于 2015-11-10 11:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般25ul已经足够了
几个样本也可以考虑50ul、100ul（取液方便点，最好也能做Mix）
我们一般用50、100ul作图用o(∩_∩)o...哈哈
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yayya[使用道具]
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发表于 2015-11-10 11:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢楼上三位参谋，在下决定用25ul体系摸条件!
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小野花[使用道具]
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发表于 2015-11-10 11:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
就像是烧开水，小壶比大壶快。
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小野花[使用道具]
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发表于 2015-11-10 11:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

做大壶的时候适当把每一步时间延长点。
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whitesheep[使用道具]
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发表于 2015-11-10 11:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

应该没有问题的！
我读书的时候经费有限，我们经常用25ul甚至更小的体系做呢。
但操作一定要细心哦！
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moonlight[使用道具]
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发表于 2015-11-10 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

abi、mj、biorad等品牌PCR仪可以设定根据样品体积计算样品温度，biometra的PCR仪只有模块温度，所以增大体积的时候，每一步的时间要稍微长一点。
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yayya[使用道具]
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发表于 2015-11-10 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

经常用10ul体系。。。
测序反应基本用5ul
节约就是好啊Blush
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