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标题:【求助】基因组DNA提取

iii_ii[使用道具]
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发表于 2015-11-11 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】基因组DNA提取

郁闷之极，昨天使用TAKARA的试剂盒提取EDTA抗凝血的全基因组DNA后，用分光光度计检测居然和空白对照的结果一样，下面我把相关的情况说一下，希望各位高手能够帮我找找原因。
1.我的血标本保存时间比较长，是在采血后于4度保存了一个星期，然后放置-20度左右冻存了2个月；
2.使用的是takara试剂盒，其中有几步离心的步骤，由于准备不充分，在离心后放置了10-20分钟再进行后续的步骤
3.70％乙醇是临时急配的
4.溶解DNA的是双蒸水
5.提取完毕后溶解之前，我在离心管底感觉隐约是能看到一点沉淀的
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发表于 2015-11-11 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

跑个电泳看一下吧
估计是降解了
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发表于 2015-11-11 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我是溶解之后马上就去分光光度计检测的，应该没那么快降解吧
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发表于 2015-11-11 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能是提取的效益不高,讲解也是一部份,但是我以前用过陆桥公司的磁珠提取血基因,100ul血放了很久的,都可以提到,跑电泳清晰看的到
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发表于 2015-11-11 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果DNA没有完全溶解也可能会出现这种情况，提取的DNA 加水以后4度溶解1到2天再检测
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发表于 2015-11-11 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我提取完毕后立即加双蒸水溶解，没有4度过夜，因为这个会出现溶解不完全吗？
takara的说明书上也没有提到要4度溶解一定时间，只提到“提取后的DNA，请用TE溶解，溶解后的DNA冷冻或4度保存都可以。但如果用灭菌蒸馏水溶解，请务必冷冻保存，以防止DNA分解”
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发表于 2015-11-11 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不要4度要室温
dna很稳定
分光计是看不出降解的
降解是在你保存血液或是在提取过程中
不是溶解
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发表于 2015-11-11 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

关键是你抽提的过程。
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发表于 2015-11-11 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
应该是基因组DNA没有提取出来吧，你做好充分的准备重新提一下试试，换成TE溶解DNA样品。
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发表于 2015-11-11 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也是用的这个试剂盒，一般情况都能看到沉淀，但是测浓度时很低，有的只有30ugml
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