【求助】用CM-H2DCFDA探针测ROS

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标题:【求助】用CM-H2DCFDA探针测ROS

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发表于 2015-11-14 16:15 资料个人空间短消息加为好友

小中大

想问一下大家用来测ROS的探针：CM-H2DCFDA，是在哪个公司买的（进口），货号是多少，谢谢。注：我是测活细胞内的ROS。

vera+[使用道具]
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发表于 2015-11-14 16:16 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 #甜# 于 2015-11-14 16:15 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

想问一下大家用来测ROS的探针：CM-H2DCFDA，是在哪个公司买的（进口），货号是多少，谢谢。注：我是测活细胞内的ROS。

请问您最后用的这个试剂，还是试剂盒？推荐一下吧。。感谢感谢

#甜#[使用道具]
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发表于 2015-11-14 16:16 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 vera+ 于 2015-11-14 16:16 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

请问您最后用的这个试剂，还是试剂盒？推荐一下吧。。感谢感谢

我用的是sigma的，货号是D6883(50MG).你也可以选择试剂盒，具体哪家的我没用过，也不是很清楚。反正就那几家，你自己再选择吧。

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发表于 2015-11-14 16:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 #甜# 于 2015-11-14 16:16 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我用的是sigma的，货号是D6883(50MG).你也可以选择试剂盒，具体哪家的我没用过，也不是很清楚。反正就那几家，你自己再选择吧。

您好。我买的就是这个粉剂。
1、看论坛上有的说用DEMO或是PBS溶解，看您以前的帖子是用无水乙醇溶的，到底该用哪个溶比较好呢？
2、我是到半小时路程的地方测流式。看您的帖子是先染好色，然后到流式的地方，再洗几遍之后上机。我想的是，能不能把全部步骤做完，装到上流式的管子中，然后冰浴密封拿到流式细胞仪的地方直接上机观测，这样行不行呢？
3、能不能把您用这个粉剂测活性氧的详细操作步骤分享一下呢？太麻烦您了。十分感谢！

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发表于 2015-11-14 16:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 vera+ 于 2015-11-14 16:17 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

您好。我买的就是这个粉剂。
1、看论坛上有的说用DEMO或是PBS溶解，看您以前的帖子是用无水乙醇溶的，到底该用哪个溶比较好呢？
2、我是到半小时路程的地方测流式。看您的帖子是先染好色，然后到流式的地方，再洗几遍之后上机 ...

1.恩，我是看说明书上建议纯乙醇溶的，DMSO肯定也是可以溶的，这个应该没什么好比较的吧。看你其它溶剂是用什么溶的，少做一次溶剂对照组。
2.如果用流式的话，最好是染好就直接上机检测，如果时间太长会影响结果。不建议你全部弄好再带过去检测。
3.其实详细步骤也没什么，我是参考书上的：
1）收集细胞：取对数生长期细胞收集细胞并调整细胞浓度至（1～10）×106/mL（每个实验所需的细胞都不一样，可以自行调整）
（2）加入药物培养（也就是造模）
（3）装载探针：加入终浓度为10uM的DCFH-DA，37 °С 5 % CO2培养箱中静置0.5 h，每隔3-5min混匀一下，使探针和细胞充分作用。
（4）用无血清的培养基或温暖的PBS液洗涤细胞3次，去除未进入细胞内的DCFH-DA。
（5）收获各组细胞，上流失细胞仪检测ROS。激发光488nm，发射光 525nm
（6）实验分四组：细胞(空白对照组)、细胞+DCFH-DA(正常组)、细胞+DCFH-DA+药物（实验组），根据情况设计实验分组。其中空白对照组是用来排除细胞自身是否会有荧光；正常组是用来检测正常情况下的数值（因氧化反应是机体必需反应之一）；实验组是用来检测药物处理后数值的变化，从而推出药物是减少氧化损伤还是促进氧化损伤。

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发表于 2015-11-14 16:18 资料个人空间短消息加为好友

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原帖由 #甜# 于 2015-11-14 16:17 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

1.恩，我是看说明书上建议纯乙醇溶的，DMSO肯定也是可以溶的，这个应该没什么好比较的吧。看你其它溶剂是用什么溶的，少做一次溶剂对照组。
2.如果用流式的话，最好是染好就直接上机检测，如果时间太长会影响结果。不建议你全部 ...

请问，最后是看平均荧光强度吧，那么用winNDI 软件打开的结果图，是不是GMean 就代表平均荧光强度啊？焦急啊焦急。。。。万分感谢。

vera+[使用道具]
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发表于 2015-11-14 16:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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请教您一下，流式测ROS，用WINMDI软件分析结果，用直方图的形式打开实验结果，直接看stats里的GMean值就行吗？还是需要圈定一部分细胞设门？怎么设呢？
急切求助啊，谢谢您！

#甜#[使用道具]
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原帖由 vera+ 于 2015-11-14 16:18 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

请教您一下，流式测ROS，用WINMDI软件分析结果，用直方图的形式打开实验结果，直接看stats里的GMean值就行吗？还是需要圈定一部分细胞设门？怎么设呢？
急切求助啊，谢谢您！ ...

直接看GMean值也可以的，因为你检测的时候细胞数以统一了。

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发表于 2015-11-14 16:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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你好，我也想做ROS测定实验，可以向你请教吗？

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发表于 2015-11-14 16:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

您好，我想请问一下，我测量ros，结果用的Mean值，但审稿人提问what intensity the gating was done to quantify ROS？不知该怎么回答。急切求助啊，谢谢您！

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