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标题:【求助】悬浮细胞换液和传代问题

vtongli[使用道具]
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【求助】悬浮细胞换液和传代问题


请教,悬浮细胞以吸出旧液1/2-2/3,加入新鲜培养液,可细胞丢失不少怎么办,每次离心又怕对细胞不好。细胞什么时候传代最合适?看有的书上说培养基变黄了就应该传代了,是这样吗?
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pou[使用道具]
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“可细胞丢失不少怎么办”是什么意思,抱歉没看懂,请解释一下
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vtongli[使用道具]
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谢谢您。我的意思是换液后,细胞比没换之前要少。怎么办?
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jiushikeshui371[使用道具]
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悬浮细胞传代,如果需要做实验大量扩增细胞的话,可以传代前先将培养瓶直立静置,待大部分细胞都沉降的细胞瓶底,勿晃动,轻轻吸出培养基,再加入新鲜培养基即可。这样细胞数目不会损失多少,而且上层吸去的也是死细胞。但建议加入新鲜培养基后分瓶扩增,毕竟一个较小的空间和有限的培养基环境下细胞扩增有限。
如果暂时不要做实验,只是维持传代的话,只要将大部分培养基吸去,留一点儿在瓶底,再加入新鲜培养基即可。
至于悬浮细胞何时传代合适,个人经验(我只养过THP-1和U937两种悬浮细胞)是待培养基变黄有些过,这时显示培养基已明显偏酸,对细胞并不适宜。一般待培养基开始变黄,这时将细胞瓶放平,细胞能密密麻麻铺满整个瓶底就要传代了,这表明细胞的生长空间要不够了,就需传代分瓶扩增。
多多交流!
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ladyhuahua[使用道具]
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我觉得悬浮的很好养,细胞损失了会再长出来啦,换液后自然细胞要少些
怕离心不好的话,1000rpm离个3~5min,没啥问题的
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nikonun[使用道具]
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一般长到85%~90%就该传代,不能等培养液变黄,一般1000rpm 4min即可。
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土坷垃[使用道具]
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普通培养瓶直立起来,静置半小时左右,务必在超净台中进行,不要晃动培养瓶,拧开瓶盖吸取1/2到1/3培养液,对细胞数量影响不大。
培液变黄与传代没有密切的联系,培养液由红转黄的时候就可以换,当然我也有过培液很黄了才换,没有发现太大的细胞周期,增殖方面的差异。
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lagua123[使用道具]
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培养瓶平放静置一会,轻轻拧开瓶盖,小心拿起,用弯头吸管吸取半液也可。吸管头应轻抵瓶壁,在液面部位缓慢吸取液体。细胞损失应该不大。
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remonte[使用道具]
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可以加入新的培养液,一瓶变两瓶啊
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fei1226com[使用道具]
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离心换液800r/min对细胞影响不大的,我的也是悬浮细胞,我发现离心换液比直接换液长的要好,因为细胞吹开以后,更有利于生长
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