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标题:【求助】24孔板如何能铺得更均匀？

吉吉0120[使用道具]
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发表于 2015-11-14 21:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】24孔板如何能铺得更均匀？

最近铺了两张231细胞的24孔板，发现每个孔都是中间有一堆细胞聚集，周围的比较稀疏，这样会影响我后面的实验，请教如何使24孔板能铺得更均匀些？
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seagate[使用道具]
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发表于 2015-11-14 21:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用的96孔板 一开始也有这样的问题 别人教了我一种方法试了试 还不错 先在板内铺一点血清 再加细胞悬液进去 这样细胞会比较分散 如果对每个孔的细胞数有所要求 乘以相应倍数就可以了
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吉吉0120[使用道具]
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发表于 2015-11-14 21:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多谢楼上的战友，但是我想96孔的滴上血清或许有用，但对于24孔的恐怕不会起太大作用吧。有没有关于24孔的方法呢？
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吉吉0120[使用道具]
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发表于 2015-11-14 21:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

首先，消化不要过头或者不足。
消化后，不论是用hank's液还是培养基洗细胞，都要先用含5%血清的培养基终止消化。
简单说94用小牛血清里滴蛋白，保护住消化造成的细胞膜损伤，避免发生细胞自我修复。
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lagua123[使用道具]
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发表于 2015-11-14 21:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你可以先放在超净台里面放上一段时间，等全部沉积在在底部以后转移至培养箱中。
或者你直接放到培养箱中，等细胞沉积下去，则轻拍培养板使细胞重悬，然后再等贴壁重复一次。
我觉着随着板空孔径越大，此类现象越严重。不知道是不是因为孔中培养基温度不均一造成的？
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dmg[使用道具]
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发表于 2015-11-14 21:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你把细胞铺板后以十字架的方式上下左右晃动，然后轻轻放入培养箱就可以了
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eric930[使用道具]
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发表于 2015-11-14 21:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 dmg 于 2015-11-14 21:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

你把细胞铺板后以十字架的方式上下左右晃动，然后轻轻放入培养箱就可以了

这个才是解决此类问题的正确方法。关于此问题在论坛里已经有好多讨论了，稍微搜索一下就会有很多
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2015-11-14 21:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

加细胞悬液时不要从中间或其他固定点加，可以以螺旋形状转圈加，也可以十字加，轻轻晃动，还有就是在加以前把离心管里的细胞间断吹打均匀，以保证开始和最后的细胞密度一致。自己摸索吧
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ero11[使用道具]
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发表于 2015-11-14 21:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最近也在做转染，用24孔板，之前做了2次都不匀，之后就越来越好了。细胞悬液加到板子里后流动，碰壁后受阻力沉到板子底，如果加液体时往板子中央加，这时细胞往周边流动，就倾向与沉到孔的四周，所以我的方法是：
1、消化一定要充分，保证细胞打散成单个
2、有的战友说十字型晃板子，这样晃后细胞很容易聚到中间，导致中间密，周边稀，我不建议这样做
3、加细胞悬液时尽量慢并轻的贴着孔壁，这样细胞慢慢铺散开会相对匀
4、种完板子后静静等2分钟，待细胞沉下去后在镜下观察，如果不满意就轻轻用吸管吹打，注意抽吸一定尽量轻，避免气泡产生
我就是这么做的，现在种板子是越来越匀啦，祝大家好运：）
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发表于 2015-11-14 21:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
种60mm或者以上的皿可以用十字架的方式上下左右晃动的方法使细胞均匀分布，但是对于六孔板或者更小的，以上方法则不是很管用。
我的方法：
细胞打成悬液时一定要多打几次，然后种入板中，先顺时钟旋转几下，然后用手指掌侧轻轻拍动板的边缘（横的边缘和纵的边缘），这种轻微的震动完全可以使得细胞逐渐分散开来。
这也是我的师兄传授的。希望对您有帮助
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