小中大1. 提前2-4天腹腔注射4%巯乙基淀粉肉汤2ml/只小鼠。
2. 引颈处死小鼠后，腹腔注入5mlPBS，按摩近半小时。
3. 抽出细胞悬液，洗涤后加入培养基，贴壁提纯1-2小时。
4. 胰酶消化贴壁细胞并收集。
不知道你的实验目的是什么 我们当时用氧化低密度脂蛋白刺激后 用油红O染色 做AS相关模型
首先确定你的肉汤有没有问题 步骤细节上需要改进 个人认为
4%(质量体积比)巯基乙酸盐肉汤：用去离子水配制，并经高压蒸汽灭菌（121℃，20min），贮存于4°C。
肉汤配制完毕后要立即高压灭菌4°C保存，常温下可见其变色并酸败。颜色会变绿
不知道你第四步为什么要用胰酶消化？不理解
我当初是用肉汤刺激96h 可以达到下表的量
刺激剂、预期收益和腹膜细胞的组成
腹腔细胞的类型
刺激剂的量
注射到收集细胞的时间
每只小鼠预期的细胞数
贴壁前MΦ的百分比
贴壁后MΦ的百分比
腹腔固有细胞
无
无
1-2×106
40-60%
83-88%
巯基乙酸盐刺激的腹膜渗出细胞
2-3ml 4%的Brewer’s巯基乙酸盐
96h（-120h）
15-25×106
＞86-95%
99%
......
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1. 我做的实验是LPS刺激巨噬细胞的。
2. 之前看到有的战友说配好的肉汤要老化效果才会好，所以我配好并高温高压消毒后，室温放置一段时间再使用的，不过并没有污染。不知道是不是这个原因导致的细胞数量过少。
3. 因为我需要提取出来巨噬细胞并种板，所以我先将腹腔灌洗液置于培养皿中培养贴壁1-2小时，之后用胰酶把他消化下来时候收集，再种板进行试验。
不知道战友在何地，我在北京，不知是否可以向你学习一下？
