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谢谢
我想也是,但就这个实验而言,还有很多具体的问题。比如结晶紫的浓度,染色时间等等,到底这些条件有无影响呢,这些条件各起的作用是什么呢?我更想知道的是这些,而且我想如果哪位战友做过的现身说法就更好了。
我使用的方法是,每孔加入0.5%结晶紫100微升,染色1小时后,离心弃上清,用PBS洗细胞1次,每孔加入1%SDS后,于546nm波长下,测定OD值。这是结合了文献的,把1%的结晶紫改为0.5%,加200微升改为加100微升。但我上面的帖子也说了,我遇到的问题,不知是何原因引起的?
此外,还有一个俱麻烦的方法,体外细胞结束培养后,去培养液,加入11%的戊二醛固定,于振荡器上摇20min,用去离子水洗涤,置空气或烘箱37度干燥,加入0.1%的结晶紫液对细胞染色,振摇30min,用蒸馏水洗涤,再干枣,加入10%乙酸对细胞吸收的结晶紫进行提取,1h后在酶标仪上测定光吸收度,波长为595nm.
这个方法太麻烦了,所以我没用。
还想问一个问题,波长有要求吗?我查到的就有4个波长。