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标题:【求助】枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和肠膜明串球菌

兔子[使用道具]
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发表于 2015-11-24 13:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和肠膜明串球菌

在做原核表达，但表达的蛋白做酶活怎么都没活性。
由于来自植物中的羟化酶，担心是大肠杆菌合成不了那么高级的酶。
不知道有什么载体可以换的？
比如：
枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和肠膜明串球菌等等。
这些表达载体各有什么特点呢？
新手求助，多谢！
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aaby[使用道具]
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发表于 2015-11-24 13:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 QQ

 小中大

【回复】

如果该蛋白在植物里头必须后修饰才有酶活的话，可能还是真核表达更适合。大肠表达可以尝试使用一些帮助折叠的伴侣分子和宿主。
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malong[使用道具]
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发表于 2015-11-24 13:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

有具体点的吗？
换真核表达系统麻烦吗？
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yuanyuan[使用道具]
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发表于 2015-11-24 13:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

可以换真核表达系统试试，在酵母中表达相对比较麻烦，要把质粒线性化后整合到酵母染色体中表达，具体做法可以参考生物公司给的操作手册
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qinqinai[使用道具]
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发表于 2015-11-24 13:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

建议真核表达，大肠合成后修饰很少的，复杂的蛋白就不一定能够正确合成，真核的表达系统如酵母可以
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mimima[使用道具]
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发表于 2015-11-24 13:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

可以在酵母中表达，应该可以
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