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标题:pcr产物两端酶切位点5‘端保护碱基问题？

绿茶公子[使用道具]
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发表于 2011-9-27 15:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

pcr产物两端酶切位点5‘端保护碱基问题？

pcr产物两端酶切位点5‘端保护碱基问题？


pcr产物两端我想加入两个酶切位点，两个酶切位点的5‘端通常都要加上4个保护碱基，请问这四个保护碱基通常要加AGCT中的哪几个？  
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PINK[使用道具]
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发表于 2011-9-27 15:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
保护碱基的添加，参考一下NEB的网站吧。
cuturl('http://www.neb.com/neb/frame_tech.html')
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发表于 2011-9-27 15:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
保护碱基的添加，参考一下NEB的网站吧。
cuturl('http://www.neb.com/neb/frame_tech.html')
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喵咪[使用道具]
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发表于 2011-9-27 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
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发表于 2011-9-27 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也很着急 , 我在引物5'端加了三个保护碱基, 用的是 XBa1和EcoR1双酶切，结果却连不上去， 我怀疑是没有酶切完全， 究竟有没有办法让两端的酶切位点酶切完全？高手帮帮我吧！
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丸子妹[使用道具]
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发表于 2011-9-27 16:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
保护碱基加3个有点嫌少了，很容易切不动，至少应该4～6个。
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绿茶公子[使用道具]
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发表于 2011-9-27 16:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢指点！可是我已经设计了引物， 我想可以多试一下，酶切时间长一点。实在不行就转到T载体上，再进行克隆了。  
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@花开花落@[使用道具]
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发表于 2011-9-27 16:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最好是转到T载体上，直接酶切的话Xba I的效率好像不是很高！
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丸子妹[使用道具]
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发表于 2011-9-27 16:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果有T载体问题就容易解决了，直接转吧，也不必再试切PCR产物了，希望不大。
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+田田+[使用道具]
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发表于 2011-9-27 16:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的PCR产物多大啊？
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