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标题:求助：全血RNA提取！--新手求助！

qiangren789[使用道具]
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发表于 2011-9-27 17:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

求助：全血RNA提取！--新手求助！

求助：全血RNA提取！--新手求助！


各位战友，我用Tizol手提RNA总是OD160/OD280在1.4左右！不是说RNA的OD160/OD280应该在2.0以上？一般人都能提到1.9以上？
所以，我在考虑是不是换kit？
麻烦各位战友帮我推荐一个可以用于全血直接抽提RNA的试剂盒！
谢谢大家！
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coolcool[使用道具]
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发表于 2011-9-27 17:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你用的是哪个公司的?基因公司的不错!全血提得没见过!  
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INK[使用道具]
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发表于 2011-9-27 17:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
全血直接抽提RNAQIAGENE的东西的确不错(如果钱允许的话),我用了效果很好比较稳定!!!  
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飞天小鹿[使用道具]
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发表于 2011-9-27 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼主,你测的应该是OD260/OD280吧!
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喵咪[使用道具]
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发表于 2011-9-27 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
血细胞中RNA量较少，测的OD值不是太准。
我同时用TRIZOL一批提取的RNA，OD260/OD280都在1.8-2.0左右，但外周血单个核细胞的比值就不好。最低的1.2。
但是做RT-PCR时，增加循环和模板，结果还可以。
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飞天小鹿[使用道具]
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发表于 2011-9-27 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是OD260/OD280!我的笔误！
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飞天小鹿[使用道具]
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发表于 2011-9-27 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用的是Invitrogen的Trizol，试了好几编，OD260/280倒是稳定的在1.3～1.4之间，每次电泳倒是都可以看到条带！
有一次我多用氯仿洗了一遍，OD260/280达到了1.69，不过电泳的时候，却只有marker了！
因为我接下来也是要做RT－PCR的，试了几次，除了marker，都没有条带。
所以，我只能一步一步分析，首先考虑RNA提的不够纯。
还请各位帮我分析一下，指点迷津！
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8黑眼圈8[使用道具]
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发表于 2011-9-27 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
全血标本一定要先用淋巴细胞分离液，分离得到单个核细胞后，才开始进行试剂合提取RNA，我们用的是invitrogen trizol试剂合;不可直接用全血进行提取RNA.
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微笑的海豚[使用道具]
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发表于 2011-9-27 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
对从细胞和组织中提取RNA效果比较好
如直接从全血中提取，建议先提白细胞。因为全血中的RNA不多，提白细胞相当于一个富集的过程  
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飞天小鹿[使用道具]
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发表于 2011-9-27 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
对啊，我是先用的淋巴细胞裂解液，得到白细胞后才用的Trizol，得到如上结果！
郁闷ing，来帮帮我吧！谢谢！
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