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标题:对溴乙锭用量的一点看法

喵咪[使用道具]
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发表于 2011-9-27 17:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

对溴乙锭用量的一点看法

对溴乙锭用量的一点看法


今天刚做了一次pcr，电泳前在加溴乙锭的时候不小心将用量加错。原本加1。5ul的我加成了15ul。汗！！！足足十倍呀！但是以外的结果是我跑出来条带在紫外下十分清晰。也出现他们说的那种（溴乙锭量多了的时候背景色太深）
通过这次试验我认为在电泳的时候溴乙锭的用量十分宽。我们基本可以不考虑量的问题。只是多了可能污染的几率有点大。
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冰激凌小姐[使用道具]
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发表于 2011-9-27 17:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你一点也不考虑它的毒性吗？
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喵咪[使用道具]
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发表于 2011-9-27 17:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不知道它的毒性究竟有多大.只知道是强至癌剂.有那位仁兄知道,可否告知一二?
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发表于 2011-9-27 17:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看到这里我也想问个问题,EB的终浓度应该是多少？
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发表于 2011-9-27 17:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
0.5ug/ml
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发表于 2011-9-27 17:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
溴乙锭通常用水配成10mg/ml的贮存液，于室温包存在棕色瓶中，这种染料通常掺入琼脂糖凝胶和缓冲液的浓度为0.5ug/ml，或者凝胶中不加ＥＢ，电泳完后将凝胶浸入含0.5ug/ml的电泳缓冲液中，室温下染色．不过我们实验室的用量偏小是0.1ug/ml加入凝胶，这种强至癌剂量越少越好，能看清楚就行了．我们一直用的是这个浓度．实验时一定要注意戴手套，不能用手碰带溴乙锭的东西，如果不小心粘上应及时洗手．
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发表于 2011-9-27 17:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
实验 是要作的，但是注意自我保护更是必要的！！我们实验室的EB用量也很小，凝胶内的终浓度接近0.1ug/ml，染色效果挺好。
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发表于 2011-9-27 17:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是临床的，第一次接触PCR实验，这两天提DNA跑电泳，1%琼脂糖凝胶反复用了5次，而且每次倒胶前，都加5ul的EB，请问这样会影响电泳结果吗？
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cute[使用道具]
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发表于 2011-9-27 17:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1%琼脂糖凝胶反复用了5次?

反复加样跑吗？结果怎么样？
如果效果不错，岂不是可以省琼脂糖？
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发表于 2011-9-27 17:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
反复用了5次，当然应该是每次融化的。因为他说“每次倒胶前加EB”。
不过我对反复用5次是比较佩服的。我们一般是用两次，至多不过三次。不过，如果保持胶和缓冲液的干净，而且融胶的容器干净，我想，是可以用4、5次的。
对于每次都加EB的做法，我认为没有必要。我用两次，但第二次从来不加EB，效果很好。如果第二次加了EB，背景就是很亮的了。实际证明，EB在胶中是不容易被破坏的，并非书上所说的那样易于‘见光分解’。放置几天或一个星期的旧胶，融后不加EB，照样用。从这一点上来将，安全问题应该注意！有占有曾说过，在60-70度温度下，EB是会升华的。所以，我的做法是，融旧胶时让胶温度降至60度以下再打开瓶口，这样就少些EB污染了。  
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