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标题:【求助】荧光定量PCR仪浅谈之一－仪器性能比较

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发表于 2015-12-1 11:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】荧光定量PCR仪浅谈之一－仪器性能比较

荧光定量PCR仪在国内市场推广从98年开始已经经历了6年，从开拓者PE（ABI）到ROCHE,再到后来鱼龙混杂，各种荧光定量PCR仪纷纷登陆我国市场，使得中国市场成为世界上最为繁荣的荧光定量PCR技术应用市场，笔者由于从一开始就从事该项技术再中国的推广，就亲身经历的几种仪器来谈谈他们的优缺点，抛砖引玉使大家在应用这项技术的过程中提供一定的帮助。
荧光定量PCR仪的鼻祖是PE7700（ABI公司推出）。而后从其进入我国市场的时间顺序上分别产生了PE5700、ROCHE的lightcycler、biorad的icycler、澳洲的ROTOR GENE3000等，还有就是在01、02年之后任何一台荧光PCR仪都在中国赚得盆满钵满之后许多荧光pcr仪纷纷进入中国，枫岭、MJ等等许许多多，不一而足。
每种仪器在市场推广过程中都会“制造”许多与其他产品不同得优势以获得相对得比较优势，但从笔者多年得使用经历和比较中得出一个结论，那就是无论厂商如何宣传，判断一台荧光PCR仪的好坏的依据不是PCR反应时间（它不是百米赛跑），不是PCR体系大小（它不是蔬菜），不是PCR仪器大小（它不是彩电），而是PCR扩增水平（非仅仅升降温速度）、荧光检测水平和荧光数据分析水平（软件）这三方面。这里笔者先谈谈PCR扩增水平。
PCR扩增水平是荧光pcr仪的基础，扩增水平的高低将直接影响整个仪器PCR过程的定量水平。荧光PCR仪与一般PCR仪对PCR扩增水平的要求并不一致。荧光PCR仪除了一般PCR仪对扩增的要求之外，更对不同管的PCR均一性有非常高的要求，管间差是衡量荧光定量PCR仪在扩增方面最主要的技术指标。
就以管间差而言，国内目前这些荧光定量PCR仪中，以PE（ABI）和ROCHE的仪器管间差最小。PE公司的仪器无一不是以PE9600为基础，而所有使用过9600的人都不会否认其在扩增方面卓越的品质，特别是在扩增的均一性方面使得PE出品的扩增仪的管间差都非常小，PE7700所达到的水平是其他仪器都很难达到的。也正因为此，PE公司才能够在推出7700标准型之后，在中国推出5700的7700型简化版仪器（全球仅在中国市场销售）。即使5700与7700比较在软件、光路检测系统等等诸多方面十分简陋，5700在实际使用过程中仍能得到较好的结果。可以说，如果没有PE公司在扩增水平上的超强优势，PE公司根本不会生产5700这种简化版垃圾仪器，即便如5700这样简陋的仪器，在当时国内市场中仍没有多少竞争对手。在大家无法承受7700高昂价格的无奈情况下，5700也不韪是一个较为折中的选择，这种局面一直维持到ROCHE的Lightcycler的出现才被打破。
ROCHE的Lightcycler为大家除了忍受PE公司的蛮横高价之外提供了第二种选择的机会。笔者认为ROCHE的Lightcycler是除7700之外唯一具有创造力和想象力的产品。ROCHE的Lightcycler原为德国宝灵曼公司自主研制开发的，后因宝灵曼整体被ROCHE兼并才成为ROCHE的品牌产品。所以我们看到ROCHE拥有的PCR和Taqman专利而Lightcycler却与Taqman有很大的差别这样非常奇怪的现象。这只是因为PE最早向ROCHE购买了Taqman和PCR的专有使用权逼得宝灵曼只能另辟蹊径的想出空气加热和毛细管反应系统。也正因为此，让我们通过ROCHE的Lightcycler真正领略了德国人在机械制造方面的创造力和想象力以及高超的机械制造水平。均匀的空气加热解决了半导体加热不一致的问题，毛细管体系用加大接触面积解决了空气作为热源其热效不高的问题。一环扣一环，其技术涵养可见一斑。然而毕竟与我们常规PCR有着巨大的不同，使得我们在使用时无法与常规系统（离心管）进行比较。在常规PCR摸好的条件在ROCHE的Lightcycler上可能得重头来过。并且最突出的问题是毛细管使用不方便和价格昂贵。
至于其他仪器，我们或多或少都可以看到其在某些方面对PE7700和ROCHE的Lightcycler的模仿。至于模仿水平的高低，我们以后再说。
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 小中大
ROTOR GENE3000 如何? 能否赐教?
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发表于 2015-12-1 11:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还有MJ的opticon呢？
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发表于 2015-12-1 11:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

挺好的介绍，要能update一下最好，现在ABI已经停产5700取而代之的是7000，后者也要被新的7300和7500取代。他们还有384孔的ABI7900。 5700发明在7700之前，功能不同，不能简单的说是7700的简化版。
Roche的产品主要是用于诊断，除了Lightcycler之外，Roche自己开发的COBAS系列产品就是这类PCR仪器。
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 小中大

荧光定量PCR仪浅谈之一－仪器性能比较之二
ROTOR GENE3000
从ROTOR GENE3000的整个机器的原理来讲是一台标准的Lightcycler仿制品。为了能够在中国急速膨胀的荧光定量PCR市场分得一定的利润而为中国市场量身定做的一款产品，它有原型机和改进型两种，从单波长(单色荧光)改进到多波长（多色荧光）。仅从使用效果来看，它基本达到了Lightcycler在光路系统中的设计要求，并克服了Lightcycler在波长选择方面与ABI系统不兼容的问题。但荧光定量PCR系统不仅只有光路检测系统，其最核心和最重要的是PCR反应系统。在这点上，ROTOR GENE3000与Lightcycler比较仍有较大的差距。空气加热eppondorf管，对于PCR这个多因素影响巨大的灵敏系统来说，单次实验应该问题不大，而要进行相对精细和大量的对比实验就勉为其难了。这也就是许多刚刚接触荧光PCR（realtimePCR）的老师和学生在调整体系的时候往往出现难以解释的实验结果而束手无策的根本原因。因为其PCR反应系统本身在两次实验对比的过程中就不具备稳定特性而根本就不就有可比性。
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发表于 2015-12-1 11:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Roche自己开发的COBAS系列产品并不是Taqman系统。
Roche自己开发的COBAS系列产品，作为全球唯一通过美国FDA认证的，可以作为诊断方法应用于临床诊断的PCR方法，具有非常良好的稳定和特异性能。所以，ROCHE2000年在国内推广Lightcycler时大量使用搭顺风车的销售方法，一遍大力宣传COBAS系列产品是全球pcr临床诊断的“金标准”，一遍又讲Lightcycler是ROCHE最新推出的升级产品。作为厂家，这种销售方法本无可厚非，但作为ROCHE这一世界著名的品牌而言，这种行为难逃“欺诈”之嫌。从笔者上述中可以看到，Lightcycler与COBAS系列产品本就不是一家出的，原理也毫不相干。只因COBAS系列产品价格，国人难以承受，而PE（现ABI）公司Taqman产品风生水起，大赚银子而惹得ROCHE非常不舒服（Taqman技术原是ROCHE的专利，由于不看好其在临床上的应用前景而转卖给了PE）
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发表于 2015-12-1 11:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
ABI prism 7000与ABI prism 7700之间有什么区别啊?是不是7700要比7000好一些啊?
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发表于 2015-12-1 12:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

其实ROCHE从未宣称过LIGHTCYCLER是COBAS的升级版.因为两者的原理确实不同.但COBAS AMPLICOR确是PCR检测的国际金标准.且ROCHE新推出的COBAS TAQMAN是TAQMAN.你把COBAS AMPLICOR 和COBAS TAQMAN搞混了
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 小中大

楼上站友的文章有些地方不够准确，请问是你自己的原创还是别人写的？
Lightcycler是原来宝利曼公司的产品，Roche买了宝利曼之后才开始卖Lightcycler。所以不可能说Lighercycler是COBAS的升级版，如果有人这么说，那只能是不懂行的人。
你说的“Taqman技术原是ROCHE的专利，由于不看好其在临床上的应用前景而转卖给了PE”也不对，Roche自己一直在用TaqMan技术在诊断仪器上，COBAS TaqMan 96早就有了，用的就是TaqMan技术，现在还有了新的TaqMan 48。ABI的产品以前只能用在研究领域，最近他们才开始开发诊断方面的产品。
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superboy[使用道具]
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 小中大
文章是我写的,我从1998年开始接触荧光PCR技术.看到大家对荧光PCR技术如此关注后总结了自己用过的一些仪器,进行比较得到的.
谢谢你指出的问题,roche和abi关于pcr和taqman的专利使用问题确实是临床和科研的区别,由于笔误而写反了.谢谢斑竹
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