生物质谱 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】做质谱的话银染考染都可以吧

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 15  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】做质谱的话银染考染都可以吧

冰激凌[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 128430
精华 0
积分 2798
帖子 1535
信誉分 100
可用分 9020
专家分 0
阅读权限 255
注册 2014-11-2
状态 离线
1

发表于 2015-12-5 13:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】做质谱的话银染考染都可以吧

打算做某个蛋白的质谱。蛋白纯化后，浓度太低，western可以检测，可是无法考染或者银染看是否纯。请教，如何保持蛋白活性的前提下将目前约4ml的蛋白溶液浓缩至约100微升(用PEG20000已经初步浓缩)。另外，做质谱的话银染考染都可以吧，样品制备有什么要求。
顶部
jishiben[使用道具]
一星
Rank: 6Rank: 6


UID 129862
精华 0
积分 3162
帖子 1864
信誉分 100
可用分 10818
专家分 0
阅读权限 255
注册 2014-12-22
状态 离线
2

发表于 2015-12-5 13:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

用超滤的方法应该没问题，买个超滤管也就100快的样子
顶部
yayayu[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 129861
精华 0
积分 2474
帖子 1388
信誉分 100
可用分 8331
专家分 0
阅读权限 255
注册 2014-12-22
状态 离线
3

发表于 2015-12-5 13:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

可以控制得到的量吗，一个管子针对同一种样品可以反复使用吗
顶部
兔子[使用道具]
一星
Rank: 6Rank: 6


UID 128223
精华 0
积分 3423
帖子 2045
信誉分 100
可用分 12135
专家分 0
阅读权限 255
注册 2014-10-27
来自 内蒙古乌兰察布集宁
状态 离线
4

发表于 2015-12-5 13:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

蛋白浓缩用3k离心管就可以，时间有点长的话，注意加蛋白酶抑制剂防止降解。
打质谱的话银染考染都可以，不跑胶提供蛋白溶液也可以，但是要提供溶液的成分，方便别人判断应该帮你怎么处理蛋白，因为溶液里很多成分对质谱有影响，要先处理再进行。
质谱的灵敏度特别高，无论做什么处理，请一定要带口罩和手套，有条件的话带帽子，否则你会在自己的质谱检测报告中看到很多keratin角蛋白的。
顶部
rrra6[使用道具]
一星
Rank: 6Rank: 6


UID 129717
精华 0
积分 3070
帖子 1780
信誉分 100
可用分 10395
专家分 0
阅读权限 255
注册 2014-12-17
状态 离线
5

发表于 2015-12-5 13:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

量可控，调节离心时间和转速，只要处理的好，超滤管可以重复使用的，网上资料很多的，可以查找下其使用方法，祝好:hand:
顶部
malong[使用道具]
一星
Rank: 6Rank: 6


UID 129814
精华 0
积分 3179
帖子 1898
信誉分 100
可用分 10775
专家分 0
阅读权限 255
注册 2014-12-20
状态 离线
6

发表于 2015-12-5 13:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

看了一下质谱相关帖子，提到银染与质谱不兼容，不是您是否用过银染打质谱的经历
顶部
yuanyuan[使用道具]
一星
Rank: 6Rank: 6


UID 128419
精华 0
积分 3587
帖子 2093
信誉分 100
可用分 12003
专家分 0
阅读权限 255
注册 2014-11-1
状态 离线
7

发表于 2015-12-5 13:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

最近我也是在细胞裂解液中纯化蛋白，有时候要纯化一个星期，就只是在细胞裂解时加过蛋白酶抑制剂（包括碘乙酰胺，PMSF,抑肽酶）。一直犹豫要不要补加抑制剂，想请教一下，我纯化过程中该以何种比例和频率补加抑制剂，抑制剂加多了会不会有副作用，望指教
顶部
malong[使用道具]
一星
Rank: 6Rank: 6


UID 129814
精华 0
积分 3179
帖子 1898
信誉分 100
可用分 10775
专家分 0
阅读权限 255
注册 2014-12-20
状态 离线
8

发表于 2015-12-5 13:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

我就是专门做质谱的，不管什么胶送过来，都要进行处理的。
顶部
PP熊[使用道具]
一星
Rank: 6Rank: 6


UID 128277
精华 1
积分 3330
帖子 1976
信誉分 102
可用分 11412
专家分 10
阅读权限 255
注册 2014-10-28
状态 离线
9

发表于 2015-12-5 14:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

您的意思是银染也可以做质谱？
顶部
大大[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 130436
精华 0
积分 2187
帖子 1194
信誉分 100
可用分 7533
专家分 0
阅读权限 255
注册 2014-12-25
状态 离线
10

发表于 2015-12-5 14:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

第一天用抗原抗体亲和层析，纯化得到的浓度虽然不高，但是western-blot能检测到。接下来反复过柱子，大概一个星期，将得到的蛋白溶液透析浓缩，可是western竟然检测不到了。很奇怪，难道是蛋白浓度低且在4度放了一个星期，蛋白降解了。浓缩条件是聚乙二醇20000，透析是4度PBS,个人认为也不会有问题。除了蛋白裂解液中的蛋白酶抑制剂，纯化的一个星期中都没有补加，不知大家如何补加了，是否对我的降解也有影响，疑惑，求指点。
顶部
 15  1/2 12››