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标题:【求助】关于红细胞裂解液

caihong[使用道具]
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1
 

【求助】关于红细胞裂解液

请问红细胞裂解的原理是什么?处理人血的配方可以用来处理其它的动物血吗,比如爬行动物的?
我用了一个红细胞裂解液的配方是:
红细胞裂解液(Tris-NH4Cl):称取3.735g氯化铵、三羟甲基氨基甲烷(Tris)1.3g加水溶解并稀释至500ml。0.22μm滤膜过滤除菌,4℃保存。细胞悬液加红细胞裂解液后,混匀静止4-5分钟,待红细胞完全破碎,1000r/min离心5分钟,弃上清去除红细胞,得到白细胞沉淀。(【发布单位】国家食品药品监督管理局)
结果第一次用的时候,觉得还可以,第二次和第三次用的时候离心后发现有絮状物质,不能很好的沉淀出白细胞了。请教各位这是什么原因?
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caihong[使用道具]
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2
 

另外我也做了血液涂片,发现有的白细胞也被破坏了。是不是我选用的红细胞裂解液不合适?
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caihong[使用道具]
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3
 

除了上述的一种红细胞裂解液配方外。我还查到了其它的有些,如下:
(一)1 试剂配制  
原液1号:10 g葡萄糖+0.6 g磷酸二氢钾+3.58 g磷酸氢二钠(7H2O)+20 ml 5 g/L酚红溶液,加双蒸水定容至1 000 ml。
原液2号:1.86 g氯化钙(2H2O)+4.0 g氯化钾+80 g氯化钠+1.04 g氯化镁+2.0 g硫酸镁(7H2O),加双蒸水定容至1 000 ml。
应用液有3种,1#:10 ml原液1号+10 ml原液2号,加双蒸水定容至100 ml。
2#:20 ml原液1号+20 ml原液2号,加双蒸水定容至100 ml。
3#:1 ml原液1号+1 ml原液2号,加双蒸水定容至100 ml。
2 红细胞裂解 
 取100 μl抗凝全血,加2 ml应用液3#,混匀15~20 s;加2 ml应用液2#,混匀15~20 s;加4 ml应用液1#,混匀15~20 s;300×g离心2 min,弃上清;收集沉淀,加PBS缓冲液,制成白细胞悬液,备用。
(这种红细胞裂解法满足了白细胞流式细胞仪检测分选要求,价格低廉,是一种简便快捷、经济实用的白细胞纯化分选方法。
(二)红细胞裂解液(0.01mol/L Tris-HCL pH7.6; 0.01mol/L NaCl; 0.005mol/L MgCl2)
(三)红细胞裂解液(139.6 mmol/L NH4Cl, 16.96 mmol/L Tris, 用1 mol/L HCl调 pH至7.2)
(四)红细胞裂解液的制备:碳酸氢钾(KHCO3)1.0g;氯化氨(NH4CL)8.3g;EDTA-Na2 0.037g,加双蒸水至1000ml,即工作液。(该配方出自《实用流式细胞术彩色图谱》)
请问有谁知道这些配方的效果有什么不同,改如何去选择适合自己的配方?多谢赐教!
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summerxx[使用道具]
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你好我最近也是要做这方面的试验,是要破坏小鼠的红细胞,不知用哪个合适,你用的是哪个?效果如何?其它的配方你还试过吗?
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我用了上述0.85%的裂解液.取血1:10加红细胞裂解液,然后红细胞计数板计数白细胞,但是在显微镜下却看不到白细胞,请教哪里出问题
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bhka[使用道具]
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唉,何需自己找,自己配,可以卖现成的商品用,方便效果又好,郑州中普医疗器械有限公司就有这货,有空看看吧,全国免费资料电话400-028-0371。郑州中普医疗器械有限公司为一家液基细胞生产企业,公司致力于脱落细胞学研发近8年技术沉淀。。。cuturl('http://shop1352308397424.cn.alibaba.com/')
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qqq111[使用道具]
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我曾用过商品化的溶血素也出现过你说的问题,问题可能有以下几个方面:
1.与标本本身的状态有关,细胞活性差时容易黏连形成絮状沉淀。
2.你的溶血素配方是做PCR还是细胞培养时用的溶血素呢?个人感觉,做细胞培养时用的溶血素为了保证细胞活性应该比做PCR时的溶血素要求更为严格,建议你购买商品化的用来做细胞培养的溶血素。
3.溶血素的温度,建议4摄氏度保存,这样溶血时减少溶血素对细胞的损伤。
4.如果是用来提单个核细胞的话,为什么不考虑用淋巴细胞分离液?这样提出来的细胞可能更纯。
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seagate[使用道具]
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我是买的 Sigma的
但是我的问题是 我要 溶解 1ml的血液,处理之后,离心 还是有红色的东西在沉淀里
不知道大量血液 怎么用 红细胞裂解液 来 消除红细胞
你用的血液是多少呢 ?
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DDD[使用道具]
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我是买的 Sigma的
但是我的问题是 我要 溶解 1ml的血液,处理之后,离心 还是有红色的东西在沉淀里
不知道大量血液 怎么用 红细胞裂解液 来 消除红细胞
你用的血液是多少呢 ?
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可以先拿羟乙基淀粉沉淀后,将白膜层吸出,再用红细胞裂解液去红。也可以用红细胞裂解液后,再用Ficoll分离
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